A cell suspension agar diffusion test using Neutral Red release to assess the relative irritancy potential of...

Synopsis An established cytotoxicity test for plastic materials in medical devices has been adapted and used to assess the relative potential irritancy of cosmetic ingredients and formulations during product development. Serum-free medium containing a novel protein supplement supported growth in suspension of LS mouse fibroblast cells. Release of the vital dye Neutral Red from pre-loaded cells suspended in agar was the endpoint. Test substances and reference standards were applied to a central well cut into the agar, a sensitive method which allowed accurate dose application and yielded consistent results. Relative irritancy potential was measured quantitatively by comparing the diameters of the clear zones of damaged cells which surround the central well. The test has been used with raw materials such as surfactants, preservatives and herbal extracts, as well as finished products ranging from shampoos and conditioners to creams, lotions and coloured cosmetics. The method is practical, versatile, reproducible and economic to use. Résumé Un test de cytotoxicité utilisé pour la détection de toxines dans les plastiques des appareils médicaux a été adapté pour prévenir le potentiel d'irritation relative. Le point mesuré est la libération de la teinture vitale rouge neutre des cellules chargées au préalable, résultant de l'incubation avec des substances tests. La mesure des diamétres de la zone claire de dilutions sequentielles de substances tests permet de calculer l'irritation potentielle d'un produit testé par rapport à un standard. Parmi les modifications, on a pu constater à l'aide d'une ligne de cellules en suspension dérivées de fibroblastes de souris L-929, la pousse en milieu sans sérum pour éviter les produits d'abattoir. A la place du sérum de veau, on a ajouté au milieu une nouvelle protéine innovatrice supportant la pousse normale en suspension. Durant la procédure de test les cellules se trouvaient en suspension dans une solution agar et les substances tests ont été appliquées sur une cellule centrale bien délimitéc sur la gélose plutôt qu'à l'aide d'un disque de papier filtre. L'application par une cellule centrale était plus sensible qu'avec un disque, permettant l'application d'une dose précise et fournissant des résultats plus fiables. Le test modifié a été utilisé sur une période de 4 ans pour des matiéres premières telles que tensioactifs, conservateurs et extraits de plantes, ainsi que des formules de shampooings, savons, lotions hydratantes et cosmétiques colorés. Ces produits ont étéévalués sur des panels de volontaires, et les produits testés sont commercialisés depuis 2 ans au moins. Le test est un moyen pratique, versatile, reproductible et économique de calculer le potentiel d'irritation relative d'une gamme de produits et ingrédients cosmktiques.