为将小鼠肠表皮解离为可活单细胞的优化协议

科学领域:

• 胃肠道学和细胞生物学
• 微生物组研究 微生物组研究
• 主机与饮食之间的相互作用

背景情况:

• 肠上皮细胞 (IECs) 对宿主微生物和宿主饮食相互作用至关重要.
• IECs由多种不同类型的细胞组成,使得功能配置文件具有挑战性.
• 了解IEC异质性是破译肠道健康和疾病的关键.

研究的目的:

• 开发并提出一个强大的协议,用于分离小鼠肠表皮.
• 为了使可活的肠上皮细胞 (IECs) 能够有效地恢复下游分析.
• 为了促进罕见的IEC种群的隔离,如色素 (EC) 细胞.

主要方法:

• 一个使用TrypLE Express和Dispase II进行组织分离的新方案.
• 关于小鼠肠道组织采集,密室隔离和酶性消化的详细步骤.
• 优化酶性消化以最大限度地恢复可行的单个IECs.

主要成果:

• 成功地解离了小鼠肠表皮,产生了数百万个可行的IEC.
• 在隔离罕见细胞群体,特别是肠染色胺 (EC) 细胞方面表现出效率.
• 协议提供了一种可扩展的方法,用于从小鼠肠道中隔离IEC.

结论:

• 本协议提供了一种可靠的方法,用于获得大量可行的小鼠IEC.
• 这种技术对于研究罕见的细胞类型及其功能特别有价值.
• 能够在宿主-微生物-饮食相互作用中对肠上皮质异质性的高级功能分析.