Secuencias de genes de cadena ligera de inmunoglobulinas de ratón antes y después de cambios somáticos

Área de la Ciencia:

• Inmunogenética La inmunogenética.
• Biología Molecular Biología Molecular
• La genómica es la genómica.

Sus antecedentes:

• Las cadenas ligeras de inmunoglobulinas son componentes cruciales del sistema inmunológico adaptativo.
• La cadena luminosa de tipo lambda I en ratones está codificada por distintos elementos genéticos.
• Comprender el reordenamiento genético es clave para la diversidad de anticuerpos.

Objetivo del estudio:

• Para determinar las secuencias de nucleótidos de la línea germinal y la inmunoglobulina de ratón reorganizada lambda I genes de cadena de luz.
• Para aclarar el mecanismo de la recombinación V(D) J en la formación de genes de inmunoglobulinas.
• Para comparar secuencias de ADN entre clones embrionarios y clones derivados de mieloma.

Principales métodos:

• Clonado de fragmentos de Eco RI-DNA de embriones de ratón BALB/c y un mieloma secretor de cadena lambda I (H2020).
• Secuenciación de ADN de fragmentos clonados, incluidas las regiones líder (L), variable (V), de unión (J) y constante (C).
• Análisis de secuencias intermedias (I-pequeño e I-grande) y regiones no traducidas.

Principales resultados:

• El clon de ADN embrionario Ig 99lambda contiene segmentos separados de codificación L y V, separados por una secuencia intermedia (I-pequeño).
• El clon de ADN embrionario Ig 25lambda contiene un segmento de ADN de unión (J) y la secuencia de región constante (C).
• El clon de ADN de mieloma Ig 303lambda muestra los segmentos V y J directamente vinculados, formando el gen reorganizado: 5'-no traducido, L, I-pequeño, V-J, I-grande, C-3'-no traducido.
• La secuencia de ADN V reorganizada en el mieloma difiere solo en dos bases de la secuencia V embrionaria, sin cambios silenciosos en los segmentos 5' no traducidos y V-codificantes.
• No se encontró homología de secuencia en o cerca de los sitios de recombinación entre los segmentos V y J.

Conclusiones:

• Los genes lambda I completos activos surgen de la recombinación somática entre el segmento de ADN codificante V y la secuencia J.
• La conservación de la secuencia de ADN observada apoya un mecanismo de recombinación que ocurre en los extremos del ADN.
• Los hallazgos confirman el modelo de recombinación V(D) J para el ensamblaje de genes de inmunoglobulina.