La desregulación de la actividad de la proteína quinasa cdelta mejora la adaptación de las células endoteliales a la...

Área de la Ciencia:

• Biología Molecular Biología Molecular
• Fisiología Celular Fisiología celular
• La bioquímica es la bioquímica.

Sus antecedentes:

• Se conoce la participación de la proteína quinasa C (PKC) en la muerte celular isquémica.
• Los roles específicos de las isoenzimas individuales de PKC en la respuesta de las células endoteliales (CE) a la hipoxia siguen sin estar claros.

Objetivo del estudio:

• Para investigar el efecto de la hipoxia en la actividad de la isoenzima PKC individual en ECs.
• Determinar el vínculo entre la regulación a la baja de PKCdelta y la función EC en condiciones hipóxicas.
• Para aclarar el mecanismo de la muerte por EC inducida por hipoxia y el papel de PKCdelta.

Principales métodos:

• Las EC de la vena umbilical humana (HUVEC) y una línea EC derivada de HUVEC (ECV) fueron expuestas a hipoxia severa (95% N2, 5% CO2) durante 24 horas.
• Se midieron la actividad específica y los niveles de proteínas de PKCalpha, PKCdelta y PKCepsilon.
• Las ECV con sobreexpresión estable de PKCdelta (PKCdelta-ECs) fueron sometidas a hipoxia para evaluar la muerte celular.
• La apoptosis se evaluó utilizando ensayos de escalera de ADN y tinción TUNEL.
• Se examinó el efecto de la inhibición de la sintasa de óxido nítrico (L-NMMA) en la actividad de PKCdelta y la muerte por EC.

Principales resultados:

• La hipoxia severa redujo significativamente la actividad específica de PKCdelta tanto en HUVEC como en ECV, mientras que las actividades de PKCalpha y PKCepsilon se mantuvieron sin cambios.
• La hipoxia no alteró los niveles de proteínas de PKCalpha, PKCdelta o PKCepsilon.
• La sobreexpresión de PKCdelta en ECs (PKCdelta-ECs) condujo a un aumento significativo en la muerte celular no apoptótica en condiciones de hipoxia en comparación con los controles.
• La inhibición de la NO sintasa no afectó la disminución inducida por hipoxia en la actividad de PKCdelta o la muerte por EC.

Conclusiones:

• La hipoxia disminuye la actividad de PKCdelta a través de un mecanismo independiente de la NO sintasa.
• La regulación a la baja de la actividad de PKCdelta por hipoxia mejora la supervivencia EC.
• Esta mayor supervivencia se atribuye a una reducción en la muerte celular no apoptótica inducida por hipoxia.