Una actividad enzimática en la proteína Sir2 de la levadura que es esencial para el silenciamiento de genes

Área de la Ciencia:

• La bioquímica es la bioquímica.
• Biología Molecular Biología Molecular
• Genética La genética.

Sus antecedentes:

• La proteína Sir2 se conserva en todas las especies y se sabe que está involucrada en el silenciamiento transcripcional.
• Su función molecular precisa ha permanecido esquiva a pesar de su importancia.

Objetivo del estudio:

• Para aclarar la función desconocida de la proteína Sir2.
• Investigar la actividad enzimática y el papel in vivo de Sir2 en el silenciamiento transcripcional.

Principales métodos:

• En ensayos enzimáticos in vitro con el uso de dinucleótido de adenina de nicotinamida (NAD+) etiquetado.
• Análisis de la modificación de proteínas utilizando anticuerpos anti-mono-ADP-ribosa.
• Mutagénesis dirigida al sitio de un residuo de histidina conservado en Sir2.
• Estudios de asociación de cromatina de proteínas Sir2 de tipo silvestre y mutantes.

Principales resultados:

• Se demostró que Sir2 transfiere fosfato de NAD+ a sí mismo y a las histonas in vitro.
• Sir2 exhibe actividad de ADP-ribosiltransferasa, modificándose a sí mismo y formando un producto reconocido por los anticuerpos anti-mono-ADP-ribosa.
• La mutación de un residuo de histidina conservado abolió la actividad enzimática de Sir2 y su función de silenciamiento in vivo.
• La proteína Sir2 mutante mantuvo la asociación con la cromatina y los factores de silenciamiento.

Conclusiones:

• Sir2 posee una actividad esencial de la ADP-ribosiltransferasa.
• Esta actividad enzimática es crítica para el papel de la proteína Sir2 en el silenciamiento de genes transcripcionales.
• El residuo de histidina conservado es vital tanto para la función enzimática de Sir2 como para su papel biológico en el silenciamiento.