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DNA Isolation01:24

DNA Isolation

DNA isolation protocols can be fast and straightforward or complex and time-consuming depending on the type and quality of DNA required for further processing. For example, plasmid DNA extraction is a bit more complicated than genomic DNA extraction because of the need for an appropriate lysis method to separate plasmid DNA from gDNA during isolation. However, for specific applications, such as long-range DNA sequencing that require a good yield of high- quality DNA samples, we need to follow...
Labeling DNA Probes03:31

Labeling DNA Probes

DNA probes are fragments of DNA labeled with a reporter tag to enable their detection or purification. The resulting labeled DNA probes can then hybridize to target nucleic acid sequences through complementary base-pairing, and may be used to recover or identify these regions.
Radioisotopes, fluorophores, or small molecule binding partners like biotin or digoxigenin, are the most widely used reporter tags for labeling DNA probes. These labels can be attached to the probe DNA molecule via...
Southern Blot02:57

Southern Blot

Agarose gel electrophoresis is very useful in separating DNA fragments by size. Running a DNA ladder containing fragments of the known length alongside the sample helps determine the approximate length of the sample DNA fragments. However, additional steps are needed to verify the sequence identity of the sample DNA fragments.
Denatured DNA fragments must be transferred onto a carrier membrane from the gel to make it accessible to a probe - a small ssDNA fragment complementary to the target DNA...
DNA Microarrays02:34

DNA Microarrays

Microarrays are high-throughput and relatively inexpensive assays that can be automated to analyze large quantities of data at a time. They are used in genome-wide studies to compare gene or protein expression under two varied conditions, such as healthy and diseased states. Microarrays consist of glass or silica slides on which probe molecules are covalently attached through surface functionalization. Most commonly, the slides are prepared through the chemisorption of silanes to silica...

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El uso de proteínas de unión al ADN como herramienta analítica.

Maxim Berezovski1, Sergey N Krylov

  • 1Department of Chemistry, York University, Toronto, Ontario M3J 1P3, Canada.

Journal of the American Chemical Society
|October 30, 2003
PubMed
Resumen

Las proteínas de unión al ADN ofrecen herramientas versátiles para analizar el ADN, el ARN y las proteínas. La utilización de la proteína de unión al ADN de cadena única (SSB) en la electroforesis capilar permite una separación y cuantificación eficientes y sin gel de estas moléculas.

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Área de la Ciencia:

  • La bioquímica es la bioquímica.
  • Biología Molecular Biología Molecular
  • Química analítica Química analítica es la que

Sus antecedentes:

  • Los análisis de afinidad tradicionales a menudo requieren matrices de tamizado para la separación electroforética.
  • Distinguir entre sondas y complejos sonda-objetivo puede ser un desafío en sistemas libres de gel.

Objetivo del estudio:

  • Desarrollar un método versátil y eficiente para analizar el ADN, el ARN y las proteínas utilizando proteínas de unión al ADN.
  • Para demostrar la separación libre de gel y la cuantificación de sondas de afinidad y sus objetivos en electroforesis capilar.

Principales métodos:

  • Utilizó sondas de afinidad específica (híbridas y sondas de aptamer), que son ADN de una sola hebra.
  • Proteína de unión al ADN de una sola hebra (SSB) empleada en la electroforesis capilar (CE) ejecuta buffer.
  • Aprovechó la unión diferencial de SSB a sondas y complejos sonda-objetivo para inducir diferencias de movilidad.

Principales resultados:

  • Se logró una separación altamente eficiente y libre de gel del ADN, el ARN y los objetivos de proteínas utilizando SSB en CE.
  • Se demostró que la concentración de SSB altera de manera dependiente las movilidades electroforéticas de las sondas y sus complejos.
  • Habilitado análisis de afinidad para ADN, ARN y proteínas sin la necesidad de tamizar matrices.

Conclusiones:

  • Las proteínas de unión al ADN, ejemplificadas por SSB, proporcionan un poderoso conjunto de herramientas para análisis moleculares versátiles.
  • Este método CE sin gel facilita la cuantificación precisa del ADN, el ARN y las proteínas.
  • Las aplicaciones potenciales incluyen la identificación del ADN genómico y el monitoreo de la expresión génica a nivel de ARNm y proteínas.