Bases estructurales para la selección de sustratos por la ARN polimerasa t7

Área de la Ciencia:

• Biología Molecular Biología Molecular
• Biología Estructural Biología estructural.
• La bioquímica es la bioquímica.

Sus antecedentes:

• Las polimerasas de nucleótidos son cruciales para la replicación del ADN y la fidelidad de la transcripción.
• La selección del sustrato en las polimerasas de ADN poli I está vinculada a la transición de una conformación abierta a una cerrada.
• Los determinantes de la selección del sustrato en las polimerasas de ADN están asociados con el estado cerrado.

Objetivo del estudio:

• Investigar si los mecanismos de selección de sustrato se conservan en las polimerasas de ARN de una sola subunidad (ARNPs).
• Para determinar la estructura del complejo de alargamiento T7 RNAP con un sustrato entrante analógico.

Principales métodos:

• Cristalografía de rayos X para determinar la estructura del complejo de alargamiento T7 RNAP.
• Análisis estructural de la unión del sustrato en la conformación abierta.
• Modelado de ARNPs de múltiples subunidades.

Principales resultados:

• T7 RNAP se une al sustrato en una conformación abierta, a diferencia de las ADN polimerasas.
• La unión al sustrato implica el emparejamiento de bases con la base de la plantilla en estado abierto.
• La tirosina 639 (Tyr639) distingue entre sustratos de ribosa y de desoxirribosa.

Conclusiones:

• La selección del sustrato en los ARNPs ocurre antes de la isomerización a la conformación catalíticamente activa.
• Este mecanismo representa una nueva vía para la selección de sustratos en las polimerasas de nucleótidos.
• Los hallazgos sugieren que este mecanismo puede conservarse en todos los ARNPs, incluidas las formas multisubunitaria.