Reporteros fluorescentes genéticamente codificados de la metilación de histonas en células vivas

Área de la Ciencia:

• La bioquímica es la bioquímica.
• Biología Molecular Biología Molecular
• Genética La genética.

Sus antecedentes:

• La metilación de la histona es una modificación epigenética crucial que regula la expresión génica.
• Los métodos existentes para detectar la metilación de histonas carecen de resolución espacial y temporal en las células vivas.

Objetivo del estudio:

• Diseñar y caracterizar nuevos reporteros fluorescentes codificados genéticamente para la metilación de histona H3.
• Para permitir el monitoreo en tiempo real de las modificaciones epigenéticas en células intactas.

Principales métodos:

• Construcción de proteínas quiméricas de cuatro partes que fusionan los péptidos de histona H3, los cromodomaines (HP1, Polycomb) y los pares de FRET (CFP, YFP).
• Caracterización de la respuesta del reportero a la metilación enzimática in vitro y en células vivas individuales utilizando la transferencia de energía de resonancia de fluorescencia (FRET).

Principales resultados:

• Desarrolló reporteros que responden a la metilación en la histona H3 lisina 9 y lisina 27.
• Se observaron aumentos significativos en las relaciones de emisión YFP/CFP (60% y 28%, respectivamente) tras la metilación.
• Funcionalidad reportera demostrada tanto en ensayos in vitro como en células vivas individuales.

Conclusiones:

• Los reporteros fluorescentes desarrollados proporcionan una poderosa herramienta para estudiar la metilación de histonas.
• Estos reporteros facilitan la investigación de alta resolución del silenciamiento de genes y la inactivación del cromosoma X.
• El sistema puede ayudar en el descubrimiento de la actividad de la histona desmetilasa.