Pantalles genéticos y selecciones para pequeñas moléculas basadas en un riboswitch sintético que activa la traducción...

Área de la Ciencia:

• Biología sintética Biología sintética.
• Biología molecular La biología molecular.
• La bioquímica es la bioquímica.

Sus antecedentes:

• La selección genética es poderosa para el cribado de biomoléculas, pero es un desafío para las moléculas pequeñas no endógenas in vivo.
• Los métodos existentes a menudo se basan en interacciones de moléculas pequeñas con proteínas difíciles de diseñar y pueden estar limitadas por las propiedades del organismo huésped, como el crecimiento lento de la levadura.

Objetivo del estudio:

• Demostrar la utilidad de los riboswitches sintéticos para el cribado genético in vivo y la selección de pequeñas moléculas en Escherichia coli.
• Para demostrar que las propiedades de los aptameros seleccionados in vitro se traducen en la selección genética in vivo.
• Explorar el potencial para descubrir nuevos riboswitches con nuevas especificidades de ligando.

Principales métodos:

• Diseñaron riboswitches sintéticos que activan la traducción de proteínas en respuesta a moléculas pequeñas específicas.
• Utilizado Escherichia coli como el sistema de huésped para el cribado y la selección in vivo.
• Realizó experimentos de selección para amplificar células con las especificidades de riboswitch deseadas de grandes bibliotecas de mutantes.

Principales resultados:

• Los riboswitches sintéticos habilitaron con éxito pantallas genéticas sensibles y selecciones de moléculas pequeñas en E. coli.
• La discriminación molecular de los aptameros seleccionados in vitro fue directamente aplicable al sistema de selección genética in vivo.
• Amplificación selectiva demostrada de células con una especificidad específica del ligando del riboswitch a partir de un exceso de un millón de células con especificidades relacionadas.

Conclusiones:

• Los riboswitches sintéticos son herramientas efectivas para la selección genética in vivo de pequeñas moléculas en E. coli.
• Este sistema permite el descubrimiento de nuevos riboswitches con especificidades de ligando a medida.
• El enfoque facilita la exploración de las interacciones moleculares y la ingeniería enzimática a través de la selección genética.