ALARMA RMN: un método experimental rápido y robusto para detectar falsos positivos reactivos en pantallas bioquímicas

Área de la Ciencia:

• Química Medicinal La Química Medicinal es un campo de estudio de la química medicinal.
• Descubrimiento de Drogas Descubrimiento de Drogas
• La bioquímica es la bioquímica.

Sus antecedentes:

• El cribado de alto rendimiento (HTS) genera numerosos éxitos de moléculas pequeñas que requieren una evaluación cuidadosa.
• Las herramientas de filtrado existentes a menudo no logran identificar falsos positivos reactivos, lo que lleva a desperdiciar recursos en pistas de drogas no viables.
• Los compuestos reactivos, incluidas las impurezas y los productos de degradación, pueden interferir con las interacciones objetivo de los fármacos.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar y validar un método rápido y confiable basado en resonancia magnética nuclear (RMN) para identificar falsos positivos reactivos en HTS.
• Para evaluar la reactividad del tiol de los compuestos y su potencial para oxidar o alquilar proteínas diana.
• Mejorar el proceso de selección de éxitos en el descubrimiento de fármacos mediante la identificación temprana de compuestos molestos.

Principales métodos:

• Desarrollo del ensayo ALARM NMR (un ensayo La para detectar moléculas reactivas por resonancia magnética nuclear).
• Monitoreo de cambios de desplazamiento químico (13)C dependientes de DTT del antígeno La humano en presencia de compuestos de ensayo.
• Validación por comparación con un ensayo de fluorescencia basado en glutatión y pruebas de más de 3500 compuestos de HTS hits.

Principales resultados:

• ALARM RMN identifica de manera confiable los falsos positivos reactivos, incluidas las impurezas y los productos de degradación.
• El ensayo demostró una alta sensibilidad en la detección de la reactividad del tiol a través de una biblioteca de compuestos diversos.
• Las herramientas actuales de filtrado in silico no pudieron identificar más de la mitad de los compuestos reactivos detectados por la RMN ALARM.
• Los datos de RMN de ALARM resultaron críticos para evitar la priorización de los compuestos reactivos para la optimización del plomo.

Conclusiones:

• La RMN ALARM es una herramienta valiosa para identificar falsos positivos reactivos en el descubrimiento de fármacos, complementando los métodos existentes.
• El ensayo mejora la eficiencia del hit triage al permitir la detección temprana de compuestos problemáticos.
• Los hallazgos subrayan las limitaciones de las herramientas in silico actuales y resaltan la necesidad de validación experimental de la reactividad del compuesto.