Modificación de la cromatina dirigida por interferencia de ARN acoplada a la transcripción de la ARN polimerasa II

Área de la Ciencia:

• Biología Molecular Biología Molecular
• Genética La genética.
• La epigenética es la epigenética.

Sus antecedentes:

• La interferencia de ARN (RNAi) es un proceso biológico conservado que utiliza pequeños ARN interferentes (siRNA) para regular la expresión génica.
• En los eucariotas, los siRNA pueden conducir a la degradación del ARN mensajero o a modificaciones epigenéticas en los loci genómicos homólogos.
• Los mecanismos precisos por los cuales los siRNA inducen modificaciones en el ADN o la cromatina no se comprenden completamente.

Objetivo del estudio:

• Para investigar el papel de la transcripción en la modificación de la cromatina dirigida por RNAi en la levadura de fisión (Schizosaccharomyces pombe).
• Para determinar si la transcripción exógena es suficiente para desencadenar cambios epigenéticos mediados por ARNi.
• Para aclarar la participación de la ARN polimerasa II y sus dominios reguladores en este proceso.

Principales métodos:

• Utilizando la levadura de fisión (Schizosaccharomyces pombe) como un organismo modelo.
• Investigando el requisito para la transcripción de secuencias de ADN homólogas en la modificación de la cromatina dirigida por RNAi.
• Evaluación del impacto de la transcripción exógena (T7 polimerasa) en el silenciamiento mediado por ARNi.
• Examinando la asociación de Ago1, una proteína clave del efector RNAi, con las transcripciones objetivo y la ARN polimerasa II.
• Analizando el efecto de truncar el dominio carboxiterminal (CTD) de la ARN polimerasa II en el silenciamiento transcripcional.

Principales resultados:

• Las modificaciones de la cromatina dirigidas por el ARNi en la levadura de fisión ocurren solo cuando se transcriben secuencias de ADN homólogas.
• La transcripción exógena por la polimerasa T7 es insuficiente para inducir estas modificaciones de la cromatina.
• Ago1 se asocia tanto con las transcripciones objetivo como con la ARN polimerasa II.
• La interrupción de la CTD de la ARN polimerasa II afecta el silenciamiento transcripcional dirigido por el ARN.

Conclusiones:

• La actividad transcripcional es esencial para la modificación de la cromatina mediada por ARN en la levadura de fisión.
• Los cambios epigenéticos dirigidos por el ARNi están acoplados a la maquinaria de transcripción endógena, específicamente involucrando a la ARN polimerasa II.
• Los hallazgos sugieren un mecanismo en el que la orientación guiada por siRNA de las transcripciones nacientes por la ARN polimerasa II conduce a alteraciones de la cromatina y silenciamiento transcripcional.