Expresión y solubilización de alta eficiencia de los heterodímeros receptores de antígenos de células T funcionales

Área de la Ciencia:

• Inmunología Inmunología.
• Biología Molecular Biología Molecular
• Ingeniería de proteínas Ingeniería de proteínas.

Sus antecedentes:

• El complejo del receptor de células T (TCR) es crucial para la inmunidad adaptativa, mediando el reconocimiento de antígenos.
• Comprender el ensamblaje y la función de los TCR es clave para desarrollar inmunoterapias.

Objetivo del estudio:

• Para diseñar los heterodímeros alfa beta de los receptores funcionales de células T (TCR) mediante la adición de dominios de la cadena zeta de TCR.
• Para evaluar la expresión de la superficie celular, la capacidad de unión de antígeno-MHC y la solubilización de los TCR diseñados.

Principales métodos:

• Se crearon construcciones quiméricas de dominios extracelulares alfa y beta de TCR fusionados con dominios zeta de TCR.
• Estas construcciones se expresaron en células RBL-2H3 y se analizó su transporte en la superficie celular.
• La evaluación funcional consistió en probar la activación por complejos específicos antígeno-MHC y evaluar la independencia de CD3.
• Se incorporaron sitios de escisión de la proteasa para la generación de heterodímeros solubles.

Principales resultados:

• Los TCR diseñados se expresaron de manera eficiente en la superficie celular como heterodímeros alfa beta ligados al disulfuro.
• Los heterodímeros expresados eran funcionales, reconociendo complejos específicos antígeno-MHC independientemente de CD3.
• Las construcciones que contienen sitios de escisión de la trombina fueron escindidas con éxito para producir heterodímeros solubles.

Conclusiones:

• La unión de los dominios zeta de TCR a los dominios alfa y beta de TCR facilita la expresión de los heterodímeros alfa beta funcionales.
• Estos heterodímeros diseñados pueden reconocer complejos antígeno-MHC sin requerir CD3.
• La incorporación de sitios de escisión de la proteasa permite la solubilización eficiente de los heterodímeros funcionales de TCR.