Resistencia inusual de la peptidil transferasa a los procedimientos de extracción de proteínas

Área de la Ciencia:

• Biología Molecular Biología Molecular
• La bioquímica es la bioquímica.
• Microbiología Microbiología.

Sus antecedentes:

• La peptidiltransferasa cataliza la formación de enlaces péptidos dentro de los ribosomas.
• Los métodos convencionales para eliminar las proteínas de los complejos de ácido nucleico a menudo inactivan esta enzima.

Objetivo del estudio:

• Para investigar la resistencia de la actividad de la peptidiltransferasa a varios tratamientos bioquímicos.
• Explorar el papel potencial del ARN ribosómico en la función de la peptidil transferasa.

Principales métodos:

• Utilizó el ensayo de "reacción en fragmentos" para medir la actividad de la peptidiltransferasa.
• Tratamientos aplicados que incluyen proteinasa K, SDS, extracción de fenol y EDTA a ribosomas y subunidades bacterianas.
• La inhibición probada por antibióticos específicos (cloranfenicol, carbomicina) y la ribonucleasa T1.1.

Principales resultados:

• Los ribosomas de Escherichia coli mantuvieron un 20-40% de actividad después del tratamiento con proteasa K/SDS, pero la perdieron después de la extracción de fenol o la exposición a EDTA.
• Los ribosomas de Thermus aquaticus mantuvieron más del 80% de actividad incluso después de extensos tratamientos con proteinasa K/SDS y fenol.
• La actividad fue específicamente inhibida por los antibióticos de la peptidil transferasa y abolida por la ribonucleasa T1.1.

Conclusiones:

• La peptidiltransferasa exhibe una resistencia significativa a los procedimientos de eliminación de proteínas.
• La estabilidad y sensibilidad a la RNasa T1 sugieren que el ARN ribosomal 23S juega un papel directo en la catálisis de la peptidil transferasa.