Contar las proteínas de citocinesis global y localmente en levaduras de fisión

Área de la Ciencia:

• Biología celular Biología celular.
• La biofísica es la biofísica.
• Biología molecular La biología molecular.

Sus antecedentes:

• Comprender la concentración de proteínas es crucial para la función celular.
• Los métodos anteriores tenían limitaciones en la medición simultánea de los niveles globales y locales de proteínas.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar y validar un método para medir las concentraciones de proteínas globales y locales in vivo.
• Para cuantificar las concentraciones de 28 proteínas citoesqueléticas y de señalización en Schizosaccharomyces pombe.

Principales métodos:

• Se utilizó la microscopía de fluorescencia para medir las concentraciones de proteínas de fusión de la proteína fluorescente amarilla (YFP).
• Promotores nativos empleados para la expresión controlada de las proteínas funcionales de fusión YFP.
• Medidas de fluorescencia validadas contra el inmunoblotting cuantitativo para la precisión de la concentración de proteínas.

Principales resultados:

• Se estableció una proporcionalidad directa entre la fluorescencia y la concentración de proteínas.
• Se determinaron concentraciones citoplasmáticas globales para 28 proteínas, que oscilan entre 0,04 y 63 micromolares.
• Se observó un enriquecimiento significativo de proteínas (hasta 7500 veces) en compartimentos celulares específicos como anillos contráctiles y cuerpos de polos de huso durante el ciclo celular.

Conclusiones:

• El enfoque de microscopía de fluorescencia desarrollado mide con precisión las concentraciones globales y locales de proteínas.
• Se ha demostrado una regulación espacial y temporal sustancial de la abundancia de proteínas en la levadura de fisión.
• Este método es aplicable para cuantificar la concentración de cualquier proteína de fusión in vivo.