Las parejas RISC humanas combinan la biogénesis de microARN y el silenciamiento de genes posttranscripcionales

Área de la Ciencia:

• Biología Molecular Biología Molecular
• ARN Biología Biología ARN
• Regulación genética Reglamento genético.

Sus antecedentes:

• La interferencia de ARN (RNAi) es un mecanismo clave de regulación génica.
• El complejo de silenciamiento inducido por ARN (RISC, por sus siglas en inglés) media el RNAi.
• Argonaute2 es conocido como el componente catalítico de RISC, pero su completa composición y ensamblaje siguen sin estar claros.

Objetivo del estudio:

• Para dilucidar la composición polipeptídica y el ensamblaje del complejo RISC.
• Investigar el mecanismo de generación de siRNA y la escisión del ARN objetivo por RISC.
• Para determinar el papel del ATP en la función RISC.

Principales métodos:

• La reconstitución bioquímica del RISC.
• Ensayos para la escisión del ARN objetivo utilizando duplexos de microARN precursor (pre-miRNA) y ARN corto de interferencia (siRNA).
• Análisis de la selección del hilo guía y la dependencia del ATP.

Principales resultados:

• RISC está compuesto por Dicer, TRBP (proteína de unión al ARN de doble cadena) y Argonaute2.
• RISC divide eficientemente el ARN objetivo utilizando el pre-miRNA como fuente de siRNA, mostrando una mayor actividad que con los dúplex de siRNA.
• RISC incorpora selectivamente la hebra guía del siRNA y funciona sin necesidad de ATP para múltiples rondas de escisión.

Conclusiones:

• El estudio define los componentes centrales del complejo RISC.
• El procesamiento de microARN y la escisión del ARN objetivo son procesos acoplados mediados por RISC.
• El ATP no es esencial para el ensamblaje de RISC, el procesamiento de miRNA o la escisión del ARN objetivo.