Reacciones de la fosfatasa alcalina mono y la diesterasa: análisis comparativo del estado de transición

Área de la Ciencia:

• La bioquímica es la bioquímica.
• La cinética de las enzimas.
• La ingeniería de proteínas es la ingeniería de proteínas.

Sus antecedentes:

• Las reacciones de transferencia de fosforilo catalizadas por enzimas a menudo implican estados de transición distintos de los de la solución.
• La fosfatasa alcalina (AP) de Escherichia coli hidroliza principalmente los monoésteres de fosfato a través de un estado de transición disociativo, similar a la solución.
• AP también exhibe actividad de la fosfodiesterasa, que típicamente implica un estado de transición más asociativo en solución.

Objetivo del estudio:

• Para investigar si el sitio activo de AP altera el estado de transición para la hidrólisis del díester de fosfato.
• Para determinar si la AP estabiliza los estados de transición similares a la solución para las actividades promiscuas.

Principales métodos:

• Análisis cinético de la hidrólisis no enzimática y catalizada por AP de diésteres de fosfato de metilfenilo sustituidos.
• Medición de los valores beta (lg) para sondear la estructura del estado de transición.

Principales resultados:

• Se encontró que el estado de transición para la hidrólisis del díester de fosfato catalizado por AP era indistinguible del estado de solución.
• El AP no parece alterar significativamente la estructura del estado de transición para la hidrólisis del díester.

Conclusiones:

• AP cataliza la transferencia de fosforilo mediante el reconocimiento y la estabilización de los estados de transición similares a los de la solución acuosa.
• La capacidad del sitio activo de AP para reconocer diversos estados de transición puede facilitar la evolución de sus actividades enzimáticas promiscuas.