La retrotransposición LINE-1 independiente de la endonucleasa en los telómeros de los mamíferos

Área de la Ciencia:

• Genética La genética.
• Biología Molecular Biología Molecular
• La genómica es la genómica.

Sus antecedentes:

• El elemento-1 intercalado largo (LINE-1 o L1) son retrotransposones no LTR abundantes que comprenden ~17% del ADN humano.
• Los elementos L1 se movilizan a través de la transcripción inversa primada en el sitio objetivo, utilizando su endonucleasa y la transcriptasa inversa.
• Existe una vía de retrotransposición L1 independiente de la endonucleasa (EN(i)) en las células del ovario del hámster chino (CHO) defectuosas en la unión final no homóloga (NHEJ).

Objetivo del estudio:

• Caracteriza los eventos de retrotransposición EN (i) en células V3 CHO con deficiencia de ADN-PKcs, telómeros disfuncionales y defectos del NHEJ.
• Investigar el papel de la disfunción de los telómeros y los factores NHEJ en la retrotransposición de L1.
• Explorar el potencial de los telómeros disfuncionales como sitios de integración para los elementos L1 que carecen de actividad endonucleasa.

Principales métodos:

• Generó y analizó eventos de retrotransposición EN (i) en células CHO V3 y células CHO XR-1 de control.
• Se evaluaron las inserciones asociadas a los telómeros en relación con las repeticiones de los telómeros (5'-TTAGGG-3').
• Utilizó la expresión transitoria de un alelo TRF2 dominante negativo en las células XR-1 para interrumpir la tapa de los telómeros.

Principales resultados:

• Aproximadamente el 30% de los eventos de retrotransposición EN (i) en células V3 CHO insertadas adyacentes a telómeros perfectos se repite de una manera específica de orientación.
• No se observaron inserciones similares asociadas a los telómeros en el control o en las células XR-1 deficientes en XRCC4.
• La interrupción de la limitación de los telómeros a través de la expresión de TRF2 dominante-negativo habilitó la EN retrotransposición asociada a los telómeros en las células XR-1.

Conclusiones:

• Los elementos L1 con actividad endonucleasa inhabilitada pueden utilizar los telómeros disfuncionales como sustratos de integración.
• La retrotransposición comparte similitudes mecánicas con la telomerasa, utilizando un OH de 3' para el primado en las lesiones del ADN o los extremos del cromosoma.
• La retrotransposición puede representar un antiguo mecanismo de reparación del ADN mediado por ARN que es anterior a la adquisición de endonucleasa en los retrotransposones no LTR.