La supresión de la angiogénesis independiente de la secuencia y del objetivo por siRNA a través de TLR3

Área de la Ciencia:

• Biología Molecular Biología Molecular
• Inmunología Inmunología.
• Oftalmología Oftalmología.

Sus antecedentes:

• Los ensayos clínicos actuales para la neovascularización coroidal cegadora (CNV) utilizan ARN pequeño interferente (siRNA) dirigido al factor de crecimiento endotelial vascular-A (VEGFA) o su receptor VEGFR1, que se basa en la interferencia del ARN intracelular (RNAi).
• Se presume que la eficacia del siRNA en estos ensayos se debe al silenciamiento genético específico de VEGFA o VEGFR1.

Objetivo del estudio:

• Investigar el mecanismo por el cual el siRNA inhibe el CNV.
• Para determinar si el efecto del siRNA en el VNC depende de la orientación de genes específicos como Vegfa o Vegfr1.
• Explorar vías alternativas para la inhibición de la neovascularización mediada por siRNA.

Principales métodos:

• Se administraron varios siRNA (genes dirigidos a no mamíferos, genes no expresados, secuencias no genómicas, secuencias RNAi-incompetentes) a ratones con CNV.
• Evaluó la supresión del VNC y la comparó con siRNAs dirigidos a Vegfa o Vegfr1.
• Investigó el papel del receptor tipo peaje 3 (TLR3) de la superficie celular, su adaptador TRIF y las citoquinas inducidas (interferón-gamma, interleucina-12) en la inhibición de la CNV mediada por siRNA.
• Se evaluó el efecto del siRNA en la neovascularización dérmica.
• Se determinó la longitud mínima de siRNA requerida para la inhibición de la neovascularización.
• Se examinó la expresión de la TLR3 superficial en las células endoteliales humanas y el efecto de una variante de TLR3 (412FF) en la citotoxicidad inducida por siRNA.

Principales resultados:

• La inhibición del VNC mediada por el siRNA se observó con varios siRNA no específicos e incompetentes con el RNAi, comparables a los siRNA dirigidos a Vegfa/Vegfr1.
• La supresión del VNC fue mediada por la TLR3 de la superficie celular, TRIF e inducción de interferón-gamma e interleucina-12, independientemente de la activación de RNAi fuera del objetivo o de la activación de interferón-alfa/beta.
• La inhibición de la neovascularización inducida por siRNA requería una longitud mínima de 21 nucleótidos, lo que sugiere una interacción directa con TLR3.
• El siRNA no dirigido suprimió efectivamente la neovascularización dérmica.
• Las células endoteliales humanas expresan TLR3 de superficie, y una variante específica de TLR3 (412FF) confirió refractariedad a la citotoxicidad inducida por siRNA.

Conclusiones:

• La inhibición de la CNV por el siRNA es un efecto de clase mediado por la activación de la TLR3 en la superficie celular, no por la interferencia del ARN intracelular dirigida a genes específicos.
• Los siRNA genéricos, mediante la activación de TLR3, pueden ofrecer una estrategia terapéutica para los trastornos angiogénicos.
• Los hallazgos sugieren el potencial de una terapia farmacogenética individualizada basada en variantes TLR3 y destacan la posibilidad de efectos vasculares o inmunológicos no anticipados de los tratamientos con siRNA.