Propiedades de clonación, expresión y transcripción del factor potenciador humano TEF-1

Área de la Ciencia:

• Biología Molecular Biología Molecular
• Reglamento genético Reglamento genético.
• Factores de transcripción Factores de transcripción

Sus antecedentes:

• El factor 1 potenciador transcripcional SV40 (TEF-1) es un regulador clave de la expresión génica.
• Los mecanismos precisos de la actividad de TEF-1, en particular su regulación específica de la célula, siguen siendo incompletamente entendidos.

Objetivo del estudio:

• Para caracterizar el ADNc que codifica el TEF-1.
• Para investigar el sitio de iniciación de la traducción de TEF-1.
• Aclarar el mecanismo de la actividad y regulación de la transcripción de TEF-1 en diferentes tipos de células.

Principales métodos:

• clonación de ADNc y secuenciación de TEF-1.
• Ensayos de traducción in vivo e in vitro.
• Ensayos de unión al ADN utilizando mejoras de SV40 (GT-IIC y Sph).
• Análisis del gen reportero en células HeLa y MPC11.
• Construcción y prueba de proteínas quiméricas GAL4-TEF-1.

Principales resultados:

• Se clonó el cDNA TEF-1, y se demostró que la traducción se inicia exclusivamente en un codón AUU in vivo.
• El TEF-1 clonado se une específicamente a las mejoras SV40 GT-IIC y Sph.
• En las células linfoides MPC11, donde los enhansons están inactivos, el TEF-1 clonado reprime la actividad endógena del TEF-1.
• La represión está mediada por la interferencia / supresión, como lo demuestran las quimeras GAL4-TEF-1.
• Las proteínas quiméricas estimulan la transcripción en las células HeLa pero no en las células MPC11, lo que indica factores específicos de la célula.

Conclusiones:

• La iniciación de la traducción TEF-1 es específica y ocurre en un codón AUU.
• Es probable que la función de transactivación de TEF-1 esté mediada por un factor intermediario transcripcional altamente limitante, potencialmente específico de la célula, titulable.
• La represión observada y la actividad específica de la célula resaltan los complejos mecanismos reguladores que rigen la función TEF-1.