La estructura cristalina de una polimerasa de la gripe aviar PA(N) revela un sitio activo de la endonucleasa

Área de la Ciencia:

• Virología Virología.
• Biología Estructural Biología estructural.
• La bioquímica es la bioquímica.

Sus antecedentes:

• El complejo de polimerasa del virus de la influenza heterotrimérica (PA, PB1, PB2) es esencial para la replicación y transcripción del ARN viral.
• Anteriormente se pensaba que la subunidad PB1 poseía actividad endonucleasa, mientras que PB2 se une a la estructura de la tapa.
• La región N-terminal de la proteína PA (PA(N)) se ha implicado en varias funciones, incluida la actividad de la endonucleasa.

Objetivo del estudio:

• Para determinar la estructura cristalina del dominio N-terminal de la proteína PA (PA(N)) de un virus de la gripe aviar H5N1.
• Para investigar la actividad de la endonucleasa de PA (((N) y su papel en la función de la polimerasa del virus de la influenza.
• Para evaluar la PA (N) como un objetivo potencial para la terapéutica anti-influenza.

Principales métodos:

• Cristalografía de rayos X para determinar la estructura de 2,2 Å de PA(N).
• Análisis bioinformático y comparación con motivos conocidos de endonucleasa.
• Mutagénesis dirigida al sitio para analizar el motivo identificado.
• Ensayos de reconstitución de las ribonucleoproteínas in vivo.
• Ensayos in vitro de la endonucleasa. ensayos de la endonucleasa.

Principales resultados:

• La estructura cristalina de PA(N) reveló una arquitectura alfa/beta con un ion de magnesio unido.
• Se identificó un motivo similar a la firma de la endonucleasa (P) DX(N) ((D/E) XK en PA(N).
• Mutagenesis y ensayos funcionales confirmaron que PA (((N), no PB1, alberga el sitio activo de la endonucleasa crítico para la actividad de la polimerasa de la influenza.
• El sitio activo de la endonucleasa en PA ((N) está altamente conservado en todas las cepas de influenza.

Conclusiones:

• El dominio N-terminal de la proteína PA (PA(N)) contiene el sitio activo de la endonucleasa esencial para la replicación del virus de la influenza.
• PA (N) juega un papel crítico en la actividad de la endonucleasa de la polimerasa del virus de la gripe.
• La naturaleza conservada del sitio activo de la endonucleasa PA(N) lo convierte en un objetivo prometedor para el desarrollo de nuevos medicamentos contra la gripe.