La endonucleasa cap-snatching de la polimerasa del virus de la gripe reside en la subunidad PA

Área de la Ciencia:

• Virología Virología.
• Biología Molecular Biología Molecular
• Biología Estructural Biología estructural.

Sus antecedentes:

• La polimerasa del virus de la gripe (PA, PB1, PB2) replica el ARN en los núcleos de las células huésped.
• Utiliza un mecanismo de captura para sintetizar ARNm virales de los pre-ARNm del huésped.
• La ubicación de la endonucleasa dentro del complejo polimerasa era previamente incierta.

Objetivo del estudio:

• Para identificar la ubicación precisa del sitio activo de la endonucleasa del virus de la influenza.
• Caracterizar el dominio de la endonucleasa bioquímica y estructuralmente.
• Proporcionar información para el desarrollo de nuevas terapias anti-influenza.

Principales métodos:

• Análisis bioquímicos para determinar la actividad de la endonucleasa.
• Estudios estructurales, incluida la cristalografía de rayos X.
• Análisis mutacional de los residuos del sitio activo.
• Pruebas de inhibición enzimática. ensayos de inhibición enzimática.

Principales resultados:

• Los residuos amino-terminales 209 de la subunidad PA contienen el sitio activo de la endonucleasa.
• Este dominio exhibe actividad endonucleasa intrínseca de ARN y ADN, activada por iones de manganeso.
• La estructura cristalina revela una semejanza con las resolvasas y las enzimas de restricción de tipo II, con un sitio activo conservado utilizando dos iones de manganeso.
• La actividad es inhibida por el ácido 2,4-dioxo-4-fenilbutanoico.

Conclusiones:

• La subunidad PA alberga la actividad de la endonucleasa del virus de la influenza.
• Los datos estructurales y bioquímicos aclaran el mecanismo y la conservación del sitio activo.
• Estos hallazgos son críticos para el diseño de inhibidores de la endonucleasa dirigidos como nuevos medicamentos contra la gripe.