Transformación bioquímica de células de ratón por fragmentos de virus del herpes simple ADN ADN

Área de la Ciencia:

• Biología Molecular Biología Molecular
• Virología Virología.
• Genética La genética.

Sus antecedentes:

• Las células L de ratón carecen de timidina quinasa (TK), presentando un modelo para la manipulación genética.
• El virus del herpes simplex tipo 2 (HSV2) codifica una enzima llamada timidina quinasa (TK).

Objetivo del estudio:

• Para determinar si el ADN HSV2 fragmentado puede conferir un fenotipo TK-positivo (TK+) a las células de ratón con deficiencia de TK.
• Para mapear la ubicación del gen HSV2 TK en el genoma viral.

Principales métodos:

• Infección de células LMTK- de ratón con ADN HSV2 fragmentado (Eco RI, Hind III, o cortado mecánicamente).
• Selección de células TK+ utilizando el medio HAT.
• Análisis de la actividad de TK a través de la termolabilidad y la electroforesis en gel de poliacrilamida.
• Pruebas de inmunofluorescencia para detectar antígenos específicos del HSV.

Principales resultados:

• Las células transformadas adquirieron un fenotipo TK+, exhibiendo actividad TK específica del virus.
• La actividad de TK en las células transformadas fue idéntica a la de las células infectadas líticamente con HSV2.
• Las células transformadas mostraron inmunofluorescencia específica del HSV.

Conclusiones:

• El ADN HSV2 fragmentado puede transformar las células de ratón en un fenotipo TK+.
• La ubicación del gen HSV2 TK en el genoma viral se puede mapear en base a estos estudios de transformación.