PCR dependiente de la reactividad: selección directa en fase de solución in vitro para la formación de enlaces.

Área de la Ciencia:

• La bioquímica es la bioquímica.
• Biología Molecular Biología Molecular
• Biología sintética Biología sintética.

Sus antecedentes:

• La selección in vitro es crucial para el descubrimiento de ácidos nucleicos funcionales y moléculas pequeñas codificadas por ADN.
• Los métodos actuales para seleccionar la reactividad de formación / escisión de enlaces son indirectos e intensivos en mano de obra, que implican múltiples pasos.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar y validar un nuevo método, la PCR dependiente de la reactividad (RDPCR), para la selección directa del ácido nucleico y la reactividad de la molécula codificada en ADN.
• Para racionalizar el proceso de identificación de moléculas con actividades catalíticas o de escisión específicas.

Principales métodos:

• Desarrollo de la PCR dependiente de la reactividad (RDPCR), un método que vincula la formación / escisión de enlaces con la amplificación de secuencias.
• Eliminación de los pasos de captura de fase sólida, lavado y elución requeridos en los métodos de selección tradicionales.
• Aplicación de RDPCR tanto para el descubrimiento de la reacción (formación de enlaces) como para el perfil de la actividad de la proteasa (clivado de enlaces).

Principales resultados:

• Desarrollo y validación exitosos de RDPCR para la selección directa.
• Demostración de la utilidad del RDPCR en la identificación de reacciones formadoras de enlaces.
• Validación del RDPCR para el perfil de actividad de la proteasa y la selección de moléculas de división de enlaces.

Conclusiones:

• RDPCR ofrece un enfoque más directo y eficiente para la selección in vitro de ácidos nucleicos funcionales y moléculas codificadas por ADN.
• El método simplifica el descubrimiento de nuevas reacciones y el perfil de las actividades enzimáticas.
• RDPCR evita la necesidad de complejas manipulaciones en varios pasos, acelerando el proceso de descubrimiento.