Las ratas knockout a través de la microinyección embrionaria de nucleasas del dedo de zinc

Área de la Ciencia:

• Biología Molecular Biología Molecular
• Genética La genética.
• Modelos de animales Modelos de animales

Sus antecedentes:

• Las herramientas actuales de genética de ratas carecen de métodos eficientes para crear mutaciones hereditarias dirigidas al sitio.
• La incapacidad para generar ratas knockout dificulta el desarrollo de modelos de enfermedades y plataformas terapéuticas.

Objetivo del estudio:

• Establecer un método para la interrupción genética dirigida en ratas utilizando nucleasas de dedo de zinc (ZFNs).
• Para demostrar la viabilidad de crear mutaciones transmitidas por la línea germinal en múltiples cepas de ratas.

Principales métodos:

• Las nucleasas de dedo de zinc (ZFN) fueron diseñadas para atacar genes específicos de rata (inmunoglobulina M y Rab38) y un gen reportero.
• ZFNs, entregados a través de ADN o ARN mensajero, se inyectaron en embriones de ratas de una célula.
• Se evaluó la frecuencia de mutación y la transmisión de la línea germinal en los animales resultantes.

Principales resultados:

• Una sola inyección de ZFNs resultó en una interrupción de alta frecuencia (25-100%) en los loci objetivo.
• Las mutaciones generadas se transmitieron de manera eficiente y fiel a través de la línea germinal.
• La interrupción genética dirigida se logró en múltiples cepas de ratas en un plazo de 4 meses.

Conclusiones:

• La interrupción genética mediada por ZFN es un método factible y eficiente para crear ratas knockout.
• Este enfoque acelera la generación de ratas genéticamente modificadas para la investigación.
• Permite el desarrollo de plataformas de anticuerpos monoclonales humanizados y nuevos modelos de enfermedades humanas.