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Real Time RT-PCR02:57

Real Time RT-PCR

Real-time reverse transcription-polymerase chain reaction, or Real-time RT-PCR, is an analytical tool used to determine the expression level of target genes. The method involves converting mRNA to complementary DNA with the help of an enzyme known as reverse transcriptase, followed by the PCR amplification of the cDNA. These two processes can be performed simultaneously in a single tube or separately as a two-step reaction.
The real-time quantification of the number of amplified products is...

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Eficaz detección de ácido nucleico por templado reductivo templador de liberación de apagado.

Raphael M Franzini1, Eric T Kool

  • 1Department of Chemistry, Stanford University, Stanford, California 94305-5080, USA.

Journal of the American Chemical Society
|November 6, 2009
PubMed
Resumen

Las nuevas sondas Q-STAR permiten la detección rápida, sensible y específica de ácido nucleico. Esta estrategia de activación de fluorescencia permite la identificación visual de la información genética, incluso la distinción de las especies bacterianas por diferencias de un solo nucleótido.

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Área de la Ciencia:

  • La bioquímica es la bioquímica.
  • Biología Molecular Biología Molecular
  • Química analítica Química analítica es la que

Sus antecedentes:

  • La detección de ácido nucleico es crucial para el diagnóstico y la investigación.
  • Los métodos actuales pueden consumir mucho tiempo o carecer de sensibilidad.
  • La detección visual directa en células vivas sigue siendo un desafío.

Objetivo del estudio:

  • Desarrollar una nueva estrategia de activación de fluorescencia con plantilla de ARN.
  • Para crear sondas de ADN altamente sensibles y específicas para la detección de ácido nucleico.
  • Para permitir la detección visual directa de material genético in vitro y en células.

Principales métodos:

  • Diseño y síntesis de las sondas "Q-STAR" (Quenching-release by STARting a Reduction).
  • Utilizando una reducción inducida por fosfina de un vinculante que contiene azida para la activación de la fluorescencia.
  • Demostrando el rendimiento de la sonda utilizando el ARNr 16S bacteriano y la discriminación del polimorfismo de un solo nucleótido.

Principales resultados:

  • Las sondas Q-STAR lograron fuertes señales de activación de fluorescencia en 20 minutos.
  • El sistema exhibió un ruido de fondo muy bajo y una amplificación de señal significativa.
  • Un par de sondas verde/rojo diferenciaron con éxito especies bacterianas basadas en una sola diferencia de nucleótido en el ARNr 16S.

Conclusiones:

  • El mecanismo de liberación del apagador reductor proporciona un método robusto para la activación de la fluorescencia.
  • Las sondas Q-STAR ofrecen una plataforma prometedora para la detección de ácidos nucleicos sensibles y específicos.
  • Esta tecnología tiene un amplio potencial para aplicaciones en el diagnóstico molecular y la obtención de imágenes de células vivas.