Cribado de alto rendimiento para identificar inhibidores que estabilizan las conformaciones de kinasa inactiva en...

Área de la Ciencia:

• Química Medicinal La Química Medicinal es un campo de estudio de la química medicinal.
• Biología Química Biología química.
• Biología Estructural Biología estructural.

Sus antecedentes:

• Los inhibidores de la kinasa son cruciales para modular la actividad de la kinasa en la investigación.
• El cribado tradicional de alto rendimiento (HTS) a menudo identifica solo inhibidores de tipo I competitivos con ATP.
• La función de la quinasa depende de las transiciones estructurales entre conformaciones activas e inactivas.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar un nuevo ensayo HTS para identificar inhibidores de la quinasa dirigidos a conformaciones específicas.
• Para examinar una biblioteca de pequeñas moléculas utilizando la kinasa p38alfa MAP enzimáticamente inactiva.
• Descubrir estabilizadores de la conformación DFG-out farmacológicamente deseable.

Principales métodos:

• Cribado de alto rendimiento de ~35,000 pequeñas moléculas orgánicas.
• Utilizó un sistema de ensayo que empleaba kinasa p38alfa MAP humana enzimáticamente inactiva.
• Cristalografía de rayos X de proteínas para determinar los modos de unión de los compuestos exitosos.

Principales resultados:

• Se han identificado pequeñas moléculas que estabilizan o inducen la conformación DFG-out de la p38alfa MAP quinasa.
• La caracterización estructural reveló cómo los compuestos afectados interactúan con la quinasa.
• Algunos compuestos de éxito validados no fueron detectados por ensayos de fosforilación convencionales.

Conclusiones:

• La detección con preparaciones de kinasa inactivas ofrece una sensibilidad única para el descubrimiento de inhibidores.
• El sistema de ensayo desarrollado identifica con éxito los nuevos inhibidores de la quinasa perdidos por los métodos clásicos.
• Este enfoque amplía el potencial para descubrir moduladores de kinasa farmacológicamente relevantes.