La fosforilación inducida por daño de Sld3 es importante para bloquear el encendido de origen tardío

Área de la Ciencia:

• Biología celular Biología celular.
• Biología Molecular Biología Molecular
• Genética La genética.

Sus antecedentes:

• El tiempo de replicación del ADN está regulado por el disparo de origen durante la fase S.
• Las células eucariotas poseen un punto de control intra-S-fase para inhibir el disparo de origen sobre el daño del ADN.
• La deficiencia en este punto de control, debido a las quinasas como ATM o Mec1, conduce a la síntesis de ADN radiorresistente.

Objetivo del estudio:

• Para identificar los sustratos de la quinasa Rad53 involucrados en el punto de control intra-S-fase.
• Para dilucidar el mecanismo por el cual se inhibe el disparo de origen tardío durante el estrés del ADN.
• Comprender el papel de la fosforilación de Sld3 y Dbf4 en la regulación de la replicación del ADN.

Principales métodos:

• Utilizado Saccharomyces cerevisiae (levadura en ciernes) como un organismo modelo.
• Se empleó análisis genético con alelos mutantes no fosforilables (SLD3-m25, dbf4-m25).
• Se evaluaron las tasas de síntesis de ADN, la sensibilidad a la hidroxiurea, la formación de focos Rad52 y la recuperación del punto de control.

Principales resultados:

• La fosforilación de la proteína de iniciación de la replicación Sld3 y la subunidad de la quinasa Cdc7 Dbf4 por Rad53 bloquea el encendido de origen tardío.
• Las células con alelos no fosforilables SLD3 y DBF4 encienden orígenes tardíos de manera inapropiada en condiciones que dañan el ADN.
• Estas células mutantes exhiben un deterioro del crecimiento, un aumento de los marcadores de inestabilidad genómica y defectos en los puntos de control.

Conclusiones:

• El punto de control intra-S-fase inhibe activamente el encendido de origen tardío a través de la fosforilación mediada por Rad53 de Sld3 y Dbf4.
• Este mecanismo es crucial para prevenir la inestabilidad genómica y promover la supervivencia celular bajo estrés de replicación.
• Se identificaron actores clave en la vía de respuesta al daño del ADN que regula el tiempo de replicación.