Identificación y aislamiento del gen del citocromo c de la levadura

Área de la Ciencia:

• Biología Molecular Biología Molecular
• Genética de la levadura Genética de la levadura
• La clonación y secuenciación de genes.

Sus antecedentes:

• El citocromo c es una proteína crucial en la respiración celular.
• Comprender el gen iso-1-citocromo c de la levadura proporciona información sobre la estructura y la función de los genes eucariotas.

Objetivo del estudio:

• Para identificar y clonar el gen de la levadura iso-1-citocromo c.
• Para analizar una mutación específica que afecta a un sitio Eco RI dentro del gen.
• Para confirmar la secuencia de ADN frente a la secuencia proteica conocida.

Principales métodos:

• Pruebas de hibridación utilizando un oligodeoxinucleótido sintético.
• Clonado de genes de tipo silvestre y de levadura mutante iso-1-citocromo c en vectores lambda gt.
• Secuenciación de ADN Maxam-Gilbert de la región codificante del gen.

Principales resultados:

• Identificaron y clonaron con éxito el gen de la levadura iso-1-citocromo c.
• Se caracterizó por una mutación de G a T que alteró un sitio de restricción de Eco RI.
• La secuenciación del ADN confirmó que 91 nucleótidos de la región codificante coincidían con la secuencia proteica conocida.

Conclusiones:

• La sonda de oligodeoxinucleótido sintético es eficaz para identificar y clonar el gen de la levadura iso-1-citocromo c.
• El estudio clonó y secuenció con éxito tanto las formas salvajes como las mutantes del gen.
• Los datos de la secuencia de ADN validan la precisión de la secuencia de proteínas para el iso-1-citocromo c. de levadura.