Estudio de RMN en estado sólido del complejo de transferencia de carga entre la ubiquinona-8 y la proteína de...

Área de la Ciencia:

• La bioquímica es la bioquímica.
• Biología Molecular Biología Molecular
• Biología Estructural Biología estructural.

Sus antecedentes:

• La ubiquinona (coenzima Q) es vital para la respiración mitocondrial y actúa como un antioxidante.
• La formación de enlaces disulfuro en E. coli incluye DsbA, DsbB y ubiquinona (UQ).
• Un hipotético complejo de transferencia de carga de tiolato de proteína UQ en la función DsbB carece de prueba definitiva.

Objetivo del estudio:

• Para investigar el complejo UQ-8-DsbB en un entorno lipídico nativo.
• Proporcionar evidencia definitiva para el intermediario complejo de transferencia de carga de tiolato de proteína UQ. intermediario complejo de transferencia de carga de proteína UQ.

Principales métodos:

• Preparación de DsbB etiquetado isotópicamente (WT y C41S) con UQ-8 endógeno y lípidos.
• Aplicación de la espectroscopia de RMN de estado sólido multidimensional avanzada.
• Análisis de las resonancias de la cadena de cabeza de UQ y de la cadena isoprenoide y los desplazamientos químicos.

Principales resultados:

• Las resonancias de la cadena isoprenoide y de los grupos de cabeza de UQ se asignaron mediante experimentos de doble filtro cuántico y desfase dipolar.
• Se observó un desplazamiento ascendente significativo de la UQ de carbonilos C1 y C4 (10,8 ppm) con un aumento del pH (de 5,5 a 8,0) en DsbB (C41S).
• Este desplazamiento indica una mayor densidad de electrones, consistente con la desprotonación del tiolato DsbB-C44 y la formación de complejos de transferencia de carga.

Conclusiones:

• Se demostró evidencia directa para el complejo de transferencia de carga de tiolato de proteína UQ-proteína.
• La formación del complejo de transferencia de carga es dependiente del pH y está relacionada con la desprotonación del tiolato de DsbB.
• Este complejo es relevante para la vía nativa de generación de enlaces disulfuro.