Un recurso de nocaut condicional para el estudio de todo el genoma de la función génica del ratón.

Área de la Ciencia:

• Genómica y Biología Molecular.
• Genética de mamíferos Genética de mamíferos
• Biología de las células madre Biología de las células madre

Sus antecedentes:

• La orientación genética en células madre embrionarias es crucial para la manipulación del genoma del ratón y la mutagénesis condicional.
• Los programas de knockout a gran escala tienen como objetivo crear un recurso integral de mutaciones específicas para todos los genes codificadores de proteínas.
• Los métodos existentes requieren optimización para la generación de alto rendimiento de diversos alelos.

Objetivo del estudio:

• Para establecer una tubería de alto rendimiento de orientación genética para la generación de alelos condicionales etiquetados con reporteros.
• Aumentar la producción de mutaciones dirigidas para una comunidad de investigación más amplia.
• Para sentar las bases para los esfuerzos de todo el genoma para descifrar la función génica de los mamíferos.

Principales métodos:

• Desarrollo de una tubería de alto rendimiento que integre el diseño computacional de alelos.
• Utilizando la construcción de vectores modulares de 96 pozos para la generación eficiente de alelos.
• Empleando estrategias de alta eficiencia de orientación genética en células madre embrionarias C57BL / 6N competentes en la línea germinal.

Principales resultados:

• Establecimiento exitoso de una tubería escalable de orientación genética.
• Generación de más de 12.000 vectores y 9.000 alelos objetivo condicionales.
• Demostración de capacidades de ingeniería genómica de alto rendimiento.

Conclusiones:

• La tubería desarrollada permite una escala sin precedentes en la generación de alelos condicionales dirigidos.
• Este enfoque de ingeniería genómica de alto rendimiento es aplicable a las células madre de ratas y humanos.
• El recurso facilita futuros estudios de todo el genoma para determinar la función de todos los genes de mamíferos.