Sustitución genética en protozoos parásitos.

Área de la Ciencia:

• Parasitología Parasitología.
• Biología Molecular Biología Molecular
• Genética La genética.

Sus antecedentes:

• Los protozoos tripanosomatídeos causan enfermedades humanas significativas.
• Identificar la función de las moléculas en su ciclo infeccioso es un desafío.
• La validación de la función génica es crucial para comprender estos patógenos.

Objetivo del estudio:

• Establecer la orientación genética homóloga en Leishmania mayor como método para la genómica funcional.
• Para probar la eficiencia de la recombinación homóloga para la interrupción de genes.
• Para crear Leishmania líneas mayores deficientes en dihidrofolato reductasa-timidilato sintasa (DHFR-TS) para estudios de quimioterapia.

Principales métodos:

• Desarrollo de una construcción de orientación genética utilizando secuencias de flanqueo de dihidrofolato reductasa-timidilato sintasa (dhfr-ts).
• Transfección de Leishmania mayor con el constructo.
• Selección de parásitos recombinantes mediante el uso de neomycin phosphotransferase.
• Generación de líneas de eliminación heterocigóticas y posterior sustitución de las copias restantes de dhfr-ts.

Principales resultados:

• El reemplazo genético homólogo se produjo en el 45% de las colonias, aumentando a casi el 100% con bajas cantidades de ADN.
• La transfección integrativa en Leishmania demostró una alta frecuencia de recombinación homóloga, similar a la de las levaduras.
• Se generaron con éxito las líneas principales de Leishmania con deficiencia funcional de DHFR-TS.

Conclusiones:

• La orientación genética homóloga es una herramienta poderosa y eficiente para la genómica funcional en Leishmania.
• Este método facilita el estudio de los genes esenciales y los objetivos farmacológicos en trypanosomatids.
• La alta frecuencia de la recombinación homóloga permite la sustitución completa de prácticamente cualquier gen de parásito.