ARN mensajero para la proteína de unión al ADN Ad2: secuencias de ADN que codifican el primer líder y la...

Área de la Ciencia:

• Biología Molecular Biología Molecular
• Virología Virología.
• Genética La genética.

Sus antecedentes:

• La infección por adenovirus 2 (Ad2) implica la transcripción de múltiples unidades de etapa temprana.
• La región II temprana codifica el ARNm para la proteína de unión al ADN de 72K (DBP), crucial para la replicación del ADN.

Objetivo del estudio:

• Para aclarar la estructura del primer líder del ARNm DBP.
• Para analizar las secuencias de ADN flanqueantes que codifican a este líder.
• Para comparar estas secuencias con las estructuras conocidas de ARNm viral y celular.

Principales métodos:

• Etiquetado in vivo del líder de ARNm con 32P.
• Aislamiento del líder a través de la hibridación del filtro de ADN al fragmento de restricción viral Eco RI F.
• Análisis de huellas dactilares de ARN de los oligonucleótidos de ARNasa T1 y ARNasa A.
• Secuenciación del ADN del fragmento viral relevante.

Principales resultados:

• Una región de 68 nucleótidos dentro del subfragmento Hae III C (coordenada 75.1) codifica el líder de ARNm DBP.
• El ADN flanqueante de 3' del líder contiene una secuencia de donante de empalme, homólogo al líder tardío mayor Ad2 y al ARNm de globina de ratón.
• El ADN aguas arriba carece de la homología del promotor 'TA-TAAA' común en otras unidades de transcripción.
• El líder de ARNm de DBP exhibe dos terminales distintivos con tapa de 5' (7meGpppA y 7meGpppG), codificados en posiciones adyacentes de ADN, lo que resulta en el escalonamiento del extremo 5'.

Conclusiones:

• La estructura líder del ARNm DBP, incluyendo el escalonamiento del extremo 5' y la falta de homología aguas arriba, lo distingue de muchos ARNm virales y celulares.
• Estas características alinean el ARNm DBP con los mensajeros tardíos de los virus SV40 y polioma.
• Los hallazgos proporcionan información sobre los mecanismos que rigen la especificación del extremo 5' del ARNm.