Expresión estable del gen neor bacteriano en Leishmania enriettiiettii

Área de la Ciencia:

• La parasitología molecular.
• La ingeniería genética es la ingeniería genética.
• ARN Biología Biología ARN

Sus antecedentes:

• La manipulación genética de protozoos parásitos es un desafío debido a la introducción limitada de genes y métodos de expresión.
• Estudios previos demostraron la expresión génica transitoria utilizando la cloramfenicol acetiltransferasa (CAT) bacteriana en estos organismos.
• Los protozoos parásitos, como la Leishmania enriettii, exhiben mecanismos únicos de trans-splicing de ARN.

Objetivo del estudio:

• Para establecer una expresión génica estable en Leishmania enriettii.
• Investigar las secuencias esenciales para el transesplicado de ARN en trypanosomatids.
• Desarrollar herramientas para el análisis genético funcional en protozoos parásitos.

Principales métodos:

• Construyó un gen quimérico con un gen de resistencia a la neomicina (neor) flanqueado por secuencias intergénicas de alfa-tubulina.
• Introdujo este constructo en las células de Leishmania enriettii.
• Seleccionado para parásitos resistentes a los fármacos que exhiben una expresión génica neor estable.

Principales resultados:

• Se logró la expresión estable del gen de resistencia a la neomicina en Leishmania enriettii resistente a los medicamentos.
• Confirmó la presencia de la secuencia de líder empalmada fusionada con el gen neor en el ARN mensajero.
• Se ha observado poliadenilación del ARNm neor y del ADN plasmítico extracromosómico en células resistentes.

Conclusiones:

• Desarrolló un método para la expresión y selección de genes estables en Leishmania enriettii.
• Demostró la utilidad de este sistema para analizar secuencias involucradas en el trans-esplicado de ARN.
• Abrió caminos para estudios genéticos funcionales en parásitos trypanosomatid.