Cuantificación proteómica directa del secretoma de las células inmunes activadas

Área de la Ciencia:

• Inmunología Inmunología.
• La proteómica es la proteómica.
• Biología celular Biología celular.

Sus antecedentes:

• La comunicación celular se basa en proteínas secretadas, cruciales para las funciones fisiológicas.
• Comprender los secretomas de las células inmunes es vital para descifrar las respuestas inmunes.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar un flujo de trabajo cuantitativo de espectrometría de masas de alta resolución para detectar y cuantificar las proteínas liberadas por las células inmunes.
• Para analizar el secretoma de resolución temporal de los macrófagos activados por el receptor Toll-like receptor 4.
• Para comparar los datos del secretoma y el transcriptoma e investigar los mecanismos reguladores de la secreción de proteínas.

Principales métodos:

• Flujo de trabajo cuantitativo de espectrometría de masas de alta resolución.
• Análisis de los macrófagos primarios activados por el receptor Toll-like receptor 4.
• Cuantificación con resolución temporal de las proteínas secretadas.
• Comparación de datos sobre el secretoma y el transcriptoma.
• Utilizando modelos genéticos para definir perfiles secretorios.

Principales resultados:

• Cuantificó la liberación en tiempo de resolución de 775 proteínas, incluidas 52 citocinas, de 150.000 macrófagos.
• Se alcanza la sensibilidad del picograma, la detección de proteínas con > 10.000 veces el aumento de la abundancia tras la estimulación.
• Identificación de la liberación desacoplada por transcripción de las proteínas lisosómicas.
• Se han definido distintos perfiles secretorios dependientes de los adaptadores de señalización intracelular.
• Mecanismos redundantes demostrados que salvaguardan la secreción de proteínas proinflamatorias y la sinergia del adaptador de señalización que promueve la liberación de proteínas antiinflamatorias.

Conclusiones:

• El flujo de trabajo desarrollado permite un análisis sensible y cuantitativo de los secretomas de las células inmunes.
• La regulación del secretoma de las células inmunes es compleja, ya que implica tanto el control transcripcional como el post-transcripcional.
• Las vías de señalización redundantes y sinérgicas regulan diferencialmente la secreción de proteínas pro- y antiinflamatorias.