Generación en un solo paso de ratones portadores de mutaciones en múltiples genes mediante ingeniería genómica...

Área de la Ciencia:

• Genética La genética.
• Biología Molecular Biología Molecular
• La bioingeniería es la bioingeniería.

Sus antecedentes:

• Generar ratones genéticamente modificados con múltiples mutaciones es tradicionalmente un proceso lento y de varios pasos.
• El sistema CRISPR/Cas ofrece una poderosa herramienta para la edición precisa del genoma.

Objetivo del estudio:

• Demostrar la capacidad del sistema CRISPR/Cas para la edición múltiple de genes en células madre embrionarias y cigotos de ratón.
• Establecer un método de un solo paso para generar ratones multi-mutantes.

Principales métodos:

• CRISPR/Disrupción simultánea mediada por cas de cinco genes (Tet1, 2, 3, Sry, Uty) en las células ES de ratón.
• Coinyección de mRNA y sgRNA de Cas9 dirigidos a Tet1 y Tet2 en zigotos.
• Coinyección de Cas9 mRNA/sgRNAs con oligos mutantes para mutaciones puntuales simultáneas en dos genes.

Principales resultados:

• Alta eficiencia lograda en la interrupción simultánea de cinco genes en las células ES.
• 80% de eficiencia en la generación de ratones con mutaciones bialélicas en Tet1 y Tet2.
• Generación exitosa de mutaciones puntuales precisas en dos genes objetivo simultáneamente.

Conclusiones:

• El sistema CRISPR/Cas proporciona un método rápido y eficiente de un solo paso para generar ratones multi-mutantes.
• Esta tecnología acelerará los estudios in vivo de la función génica, la redundancia y la epistasis.