Las sondas FIT de ADN con brillo mejorado para imágenes de ARN sin lavado en tejidos

Área de la Ciencia:

• Biología Molecular Biología Molecular
• La biofísica es la biofísica.
• El microscopio de la microscopía.

Sus antecedentes:

• Los oligonucleótidos fluorogénicos son cruciales para las imágenes de ARN celular y tisular.
• La alta respuesta a la fluorescencia y el brillo son esenciales para detectar el ARN contra la autofluorescencia de fondo, especialmente cuando el lavado de la sonda no es factible.
• Las sondas existentes con apagado de fluorescencia mejoran la capacidad de respuesta, pero a menudo carecen de brillo suficiente.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar nuevas sondas de hibridación que combinen una alta capacidad de respuesta a la fluorescencia con un brillo de señal mejorado para imágenes de ARN.
• Para superar las limitaciones de la autoextinción en sondas multi-tinte previamente desarrolladas.
• Para permitir imágenes directas y eficientes de ARN en muestras biológicas complejas como tejidos.

Principales métodos:

• Desarrollo de sondas de intercalación forzada de ADN (FIT) sin apagador que utilizan tintes de naranja tiazol (TO) como sustitutos de la nucleobasa.
• Combinación del nucleósido TO sensible con el análogo emisor de oxazolopiridina JO para mejorar el brillo.
• Caracterización del rendimiento de la sonda, incluida la capacidad de respuesta a la fluorescencia (F / F0) y el coeficiente de extinción molar.

Principales resultados:

• Las sondas FIT TO/JO de un solo hilo exhiben una fluorescencia mínima, mientras que la hibridación al ARN objetivo evita el enfriamiento, lo que lleva a una emisión brillante.
• El nucleósido TO actúa como un colector de luz, aumentando el coeficiente de extinción y transfiriendo energía al emisor JO, lo que resulta en un brillo de 43 mL mol-1 cm-1).
• Se logró una exitosa imagen microscópica de fluorescencia directa de oskar mRNA en tejidos complejos utilizando sondas TO/JO FIT bajo excitación de campo amplio.

Conclusiones:

• Las sondas TO/JO FIT ofrecen un avance significativo en las imágenes de ARN al proporcionar una alta capacidad de respuesta y un brillo excepcional.
• Este método permite obtener imágenes rápidas y directas de ARN en los tejidos sin requerir pasos de lavado extensos o técnicas especializadas de amplificación.
• Las sondas desarrolladas facilitan la visualización avanzada de ARN, lo que hace que las imágenes sofisticadas sean accesibles con equipos de microscopía estándar.