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RNA-seq03:21

RNA-seq

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RNA sequencing, or RNA-Seq, is a high-throughput sequencing technology used to study the transcriptome of a cell. Transcriptomics helps to interpret the functional elements of a genome and identify the molecular constituents of an organism. Additionally, it also helps in understanding the development of an organism and the occurrence of diseases. 
Before the discovery of RNA-seq, microarray-based methods and Sanger sequencing were used for transcriptome analysis. However, while...
9.4K
In-situ Hybridization02:31

In-situ Hybridization

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In situ hybridization (ISH) is a technique used to detect and localize specific DNA or RNA molecules in cells, tissue, or tissue sections using a labeled probe. The technique was first used in 1969 for the investigation of nucleic acids. It is currently an essential tool in scientific research and clinical settings, especially for diagnostic purposes.
Types of probes and labels
A probe is a complementary strand of DNA or RNA that binds to corresponding nucleotide sequences in a cell. Many...
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Ribosome Profiling02:24

Ribosome Profiling

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Ribosome profiling or ribo-sequencing is a deep sequencing technique that produces a snapshot of active translation in a cell. It selectively sequences the mRNAs protected by ribosomes to get an insight into a cell’s translation landscape at any given point in time.
Applications of ribosome profiling
Ribosome profiling has many applications, including in vivo monitoring of translation inside a particular organ or tissue type and quantifying new protein synthesis levels.
The technique...
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Secuenciación de ARN subcelular altamente multiplexado in situ.

Je Hyuk Lee1, Evan R Daugharthy, Jonathan Scheiman

  • 1Wyss Institute, Harvard Medical School, Boston, MA 02115, USA.

Science (New York, N.Y.)
|March 1, 2014
PubMed
Resumen

La secuenciación fluorescente de ARN in situ (FISSEQ) permite a los investigadores mapear la expresión génica y la localización del ARN dentro de las células. Este método mejora la detección de una sola molécula para estudiar los procesos celulares in situ.

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Área de la Ciencia:

  • Biología Molecular Biología Molecular
  • La genómica es la genómica.
  • Biología celular Biología celular.

Sus antecedentes:

  • Comprender la expresión génica espacial requiere una localización precisa del ARN dentro de las células.
  • Los métodos actuales se enfrentan a limitaciones en la resolución óptica y el ruido de la señal para la detección de una sola molécula.

Objetivo del estudio:

  • Introducir la secuenciación fluorescente de ARN in situ (FISSEQ) para la transcriptómica espacial de alta resolución.
  • Demostrar la capacidad de FISSEQ para analizar la expresión y localización de ARN in situ.

Principales métodos:

  • Desarrolló FISSEQ, un método que implica la secuenciación in situ de amplicones de ADN complementario entrelazado (ADNc).
  • FISSEQ aplicado a fibroblastos primarios humanos utilizando un ensayo de curación de heridas simulado.
  • Se generaron lecturas de 30 bases para 8102 genes in situ.

Principales resultados:

  • Mapeó con éxito la expresión y localización del ARN en fibroblastos humanos.
  • FISSEQ demostró compatibilidad con secciones de tejido y embriones de montaje completo.
  • Reducción de las limitaciones de la resolución óptica y las señales ruidosas en la detección de moléculas individuales.

Conclusiones:

  • FISSEQ proporciona una poderosa plataforma para la detección masiva y paralela de elementos genéticos in situ.
  • Permite la investigación del fenotipo celular, la regulación génica y el entorno celular.
  • Avanza en el estudio de la organización espacial de la expresión génica a resolución de un solo nucleótido.