La mutación directa mediada por CRISPR de los genes del cáncer en el hígado del ratón

Área de la Ciencia:

• Biología Molecular Biología Molecular
• Genética La genética.
• Investigación del cáncer Investigación del cáncer.

Sus antecedentes:

• Los modelos tradicionales de cáncer de ratón se basan en la transgénesis o la orientación genética de las células madre embrionarias.
• El desarrollo de nuevos métodos para el modelado in vivo del cáncer es crucial para la genómica funcional.

Objetivo del estudio:

• Establecer un nuevo sistema CRISPR/Cas para la generación in vivo de modelos de cáncer de hígado en ratones salvajes.
• Para demostrar la viabilidad de mutar directamente los genes supresores de tumores y oncogenes en el hígado.

Principales métodos:

• Utilizó inyección hidrodinámica para administrar plásmidos CRISPR / Cas9 y ARN guía único (sgRNA) dirigidos a Pten y p53 in vivo.
• Plasmidos Cas9 co-inyectados con sgRNAs y oligonucleótidos de donantes de ADN para introducir mutaciones específicas en el gen beta-catenina.

Principales resultados:

• La mutación de Pten mediada por CRISPR tiene efectos de deleción de genes fenocopiados, causando acumulación de lípidos y una elevada fosforilación de Akt.
• Pten y p53 simultáneos dirigidos a tumores hepáticos inducidos que se asemejan a los de los modelos Cre-LoxP.
• Confirmadas mutaciones bialélicas en Pten y p53 en tumores hepáticos generados.
• Generó con éxito hepatocitos con localización nuclear de beta-catenina a través de la edición de genes dirigidos.

Conclusiones:

• El sistema CRISPR / Cas ofrece un enfoque factible y rápido para la mutación directa de genes de cáncer en el hígado.
• Este método presenta una nueva vía para el rápido desarrollo de modelos de cáncer de hígado y estudios de genómica funcional.