Videos de Experimentos Relacionados
Ubicación de los sitios de unión de Ca2+ de alta afinidad dentro del dominio transmembrana previsto del retículo
1Banting and Best Department of Medical Research, C. H. Best Institute, University of Toronto, Ontario, Canada.
Nature
|June 8, 1989
Resumen
Los investigadores identificaron aminoácidos clave en la enzima ATPasa (Ca2+-ATPasa) que transporta el calcio. Seis residuos específicos cerca del dominio transmembrana son cruciales para la unión de calcio de alta afinidad y la función de transporte.
Área de la Ciencia:
- La bioquímica es la bioquímica.
- Biología Molecular Biología Molecular
- Transporte de la membrana Transporte de la membrana
Sus antecedentes:
- Las bombas catiónicas, como la Ca2+-ATPasa, transportan iones a través de un intermediario fosfoenzimático.
- A pesar de las estructuras conocidas, los sitios de unión catiónica de alta afinidad siguen siendo elusivos.
Objetivo del estudio:
- Para identificar aminoácidos específicos responsables de la unión de Ca2+ en el retículo sarcoplásmico Ca2+-ATPasa.
- Para aclarar la base estructural de la unión de iones de calcio de alta afinidad.
Principales métodos:
- Se empleó una mutagenesis específica del sitio dirigida por oligonucleótidos.
- Las enzimas Ca2+-ATPasa mutantes se crearon mediante la alteración de residuos específicos de aminoácidos.
Principales resultados:
- La alteración de Glu 309, Glu 771, Asn 796, Thr 799, Asp 800 o Glu 908 resultó en una pérdida completa del transporte de Ca2+ y la fosforilación dependiente de Ca2+.
- Las enzimas mutantes mostraron fosforilación con fosfato inorgánico, incluso cuando el Ca2+ estaba presente, a diferencia del tipo salvaje.
Conclusiones:
- Al menos seis residuos polares que contienen oxígeno son críticos para la unión de Ca2+.
- Estos residuos se encuentran cerca del centro del dominio transmembrana y probablemente forman los sitios de unión de Ca2+ de alta afinidad.