Activación transcripcional a escala genómica por un complejo CRISPR-Cas9 diseñado por ingeniería

Área de la Ciencia:

• Biología Molecular Biología Molecular
• Genética La genética.
• Biotecnología La biotecnología es la biotecnología.

Sus antecedentes:

• La perturbación robusta de la expresión génica es crucial para comprender la función de los genes.
• La tecnología CRISPR-Cas9 ofrece una poderosa plataforma para la manipulación genética.

Objetivo del estudio:

• Diseñar un complejo CRISPR-Cas9 para una activación transcripcional eficiente en localizaciones genómicas endógenas.
• Para investigar las reglas de orientación del ARN guía único (sgRNA) para la activación transcripcional.
• Para detectar genes que confieren resistencia a un inhibidor de BRAF tras su activación.

Principales métodos:

• Ingeniería guiada por la estructura de los complejos CRISPR-Cas9 para la activación transcripcional.
• Utilizando complejos de activación de Cas9 diseñados para estudiar las reglas de orientación del sgRNA.
• Realizar la activación de genes múltiplexados y la regulación al alza de transcripciones largas de ARN no codificante intergenico (ARNlinc).
• Síntesis de una gran biblioteca de guías para una pantalla de todo el genoma para la resistencia al inhibidor BRAF.

Principales resultados:

• Se ha demostrado una activación transcripcional eficiente en los loci endógenos utilizando activadores Cas9 diseñados.
• Reglas de orientación de sgRNA identificadas para una activación transcripcional efectiva.
• Se logró con éxito la activación multiplexa de diez genes y la regulación ascendente de las transcripciones de lincRNA.
• Descubrieron genes conocidos y nuevos que confieren resistencia al inhibidor BRAF a través de una pantalla a gran escala.
• Se validaron los resultados del cribado y se encontró una firma de expresión génica correlacionada con la resistencia al inhibidor de BRAF.

Conclusiones:

• Los activadores Cas9 diseñados representan una poderosa tecnología para la perturbación genética.
• Este enfoque permite una activación transcripcional eficiente y pantallas genómicas funcionales a gran escala.
• Los hallazgos tienen implicaciones para la comprensión de los mecanismos de resistencia a los medicamentos y el desarrollo de nuevas estrategias terapéuticas.