Determinación de la ocupación enzimática in vivo utilizando la cinética de disociación del inhibidor

Área de la Ciencia:

• Farmacología
• La bioquímica
• Descubrimiento de drogas

Sus antecedentes:

• La evaluación de la ocupación objetivo in vivo es crucial para predecir la eficacia del fármaco.
• Los métodos actuales para evaluar la ocupación objetivo son a menudo técnicamente difíciles y carecen de precisión cuantitativa.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar un método sencillo y cuantitativo para determinar la ocupación enzimática in vivo sin reactivos especializados.
• Aplicar este método para medir la ocupación del inhibidor de la catepsina K en el tejido óseo.

Principales métodos:

• Desarrolló un ensayo de dilución por salto utilizando cinética de disociación lenta.
• Actividad enzimática analizada mediante el monitoreo de la rotación del sustrato después de la disociación del inhibidor.
• Ocupación calculada a partir de la relación entre las tasas de reacción iniciales y las de estado estacionario (vi/vs).

Principales resultados:

• El método determinó cuantitativamente la ocupación del inhibidor Cat K en el tejido óseo del fémur de conejo.
• Se ha demostrado una ocupación dependiente de la dosis con el inhibidor Cat K MK-0674, logrando una ocupación casi completa a 1,0 mg/ kg.
• El ensayo también permitió medir los niveles totales de Cat K en el tejido objetivo.

Conclusiones:

• La cinética de disociación lenta ofrece un enfoque sólido y cuantitativo para la evaluación de la ocupación del objetivo in vivo.
• Este método mejora la consistencia al obtener datos de enzimas ocupadas y no ocupadas en el mismo ensayo.
• Los hallazgos apoyan la utilidad de este método en el descubrimiento de fármacos para evaluar inhibidores de enzimas.