disección del potenciador de BCL11A por mutagenesis de saturación in situ mediada por Cas9

Área de la Ciencia:

• La genómica
• Biología molecular
• Biología del desarrollo

Sus antecedentes:

• Los potenciadores son cruciales para la identidad celular, a menudo identificados por marcas de cromatina y estudios de ganancia de función.
• Los estudios de pérdida de función son esenciales para confirmar las necesidades de potenciadores en su contexto genómico nativo.
• Anteriormente se identificó un potenciador eritroide de BCL11A, vinculado a los niveles de hemoglobina fetal, con su ortólogo de ratón esencial para la expresión de BCL11A eritroide.

Objetivo del estudio:

• Realizar la mutagenesis de saturación in situ de los potenciadores eritroides BCL11A en humanos y ratones mediante el uso de bibliotecas de ARN guía CRISPR- Cas9 agrupadas.
• Identificar las características mínimas críticas y las vulnerabilidades de estos potenciadores.
• Validar el potenciador eritroideo BCL11A como objetivo terapéutico para la reinducción de la hemoglobina fetal.

Principales métodos:

• Desarrollo y aplicación de bibliotecas de ARN guía CRISPR-Cas9 agrupadas para la mutagenesis de saturación.
• Interrogatorio funcional in situ de potenciadores humanos y de ratones.
• Edición de progenitores humanos primarios y transgénesis de ratón para su validación.

Principales resultados:

• Identificación de secuencias mínimas críticas y vulnerabilidades discretas dentro de los potenciadores eritroides BCL11A.
• Demostración de la función conservada pero la arquitectura divergente entre los potenciadores de humanos y ratones.
• Validación del potenciador eritroideo BCL11A como objetivo para la reinducción de la hemoglobina fetal a través de la edición experimental y la transgénesis.

Conclusiones:

• El potenciador eritroideo BCL11A posee características críticas, algunas de las cuales parecen específicas de los primates.
• El potenciador eritroideo BCL11A es un objetivo validado para la edición terapéutica del genoma dirigida a reinducir la hemoglobina fetal.
• El enfoque de cribado desarrollado es ampliamente aplicable para el análisis funcional de elementos genómicos no codificantes.