La timidilato sintasa bacteriana se une a dos moléculas de sustrato y cofactor sin cooperación

Área de la Ciencia:

• La bioquímica
• Enzimología
• Biología molecular

Sus antecedentes:

• La timidilata sintasa (TSasa) es una enzima crítica para la síntesis de ADN, lo que la convierte en un objetivo farmacológico clave.
• Las exposiciones de Tase
• reactividad en la mitad de los sitios,
• una forma de cooperatividad negativa con una base mecánica poco clara.

Objetivo del estudio:

• Para diseccionar termodinámicamente la unión de múltiples sitios de dUMP a la TSasa de E. coli.
• Para resolver los informes contradictorios sobre la base de la reactividad de la mitad de los sitios de TSase.

Principales métodos:

• Calorimetría de titulación isotérmica (ITC) para el análisis de la termodinámica de unión.
• Titulación por resonancia magnética nuclear (RMN) para estudiar las interacciones de las subunidades y la formación de complejos.

Principales resultados:

• dUMP se une a la TSasa de E. coli libre y unida de forma individual con una afinidad casi igual.
• El análisis termodinámico revela efectos alostéricos mínimos (ΔG°bind) entre los sitios de unión.
• Los datos de RMN indican una cooperatividad menor entre las subunidades en la formación de complejos ternales con 5F-dUMP y cofactor.

Conclusiones:

• La comunicación funcional entre las subunidades de TSasa es mínima tanto durante la unión al sustrato como durante la formación del complejo ternario.
• La reactividad observada en la mitad de los sitios no se debe principalmente a efectos alostéricos significativos en la formación de complejos de unión o iniciales.