Análisis transcripcional de tejido intacto multiplexado en resolución celular

Área de la Ciencia:

• Biología molecular
• Biotecnología
• La genómica

Sus antecedentes:

• Las imágenes de tejido de alta resolución actuales se limitan al etiquetado de proteínas.
• El etiquetado de ácido nucleico volumétrico ofrece un mayor potencial para la detección de variantes de ARN y ARN no codificantes.
• Los métodos basados en anticuerpos para grandes volúmenes de tejido enfrentan limitaciones de costo, disponibilidad y multiplexación.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar un método versátil, de alto contenido y escalable para el fenotipo molecular de tejidos intactos.
• Para permitir la detección robusta de varias especies de ARN en grandes volúmenes de tejido.
• Para superar las limitaciones de las técnicas de imagen basadas en proteínas actuales.

Principales métodos:

• Desarrolló una química basada en carbodiimida para la retención estable de ARN en tejidos clarificados.
• Se utilizaron herramientas de amplificación para la detección multiplexada de ácidos nucleicos etiquetados.
• Se aplicó el método a los volúmenes de tejido de roedores y humanos.

Principales resultados:

• Ha permitido con éxito la retención estable y la detección multiplexa de ARN en tejidos clarificados.
• Se ha demostrado una medición robusta de las firmas de transcripción, los marcadores de identidad celular y los ARN no codificantes.
• Validar el método en muestras de tejido de roedores y humanos.

Conclusiones:

• La química basada en carbodiimida proporciona una solución escalable para el etiquetado volumétrico de ácido nucleico en tejidos intactos.
• Esta tecnología facilita el fenotipo molecular de alto contenido, ampliando las posibilidades de investigación.
• Se establece un recurso en línea de sondas validadas para fomentar el desarrollo comunitario.