Un ensayo de polarización por fluorescencia para la unión a un factor inhibidor de la migración de macrófagos y...

Área de la Ciencia:

• La bioquímica
• Química medicinal
• Biología estructural

Sus antecedentes:

• El factor inhibidor de la migración de los macrófagos humanos (MIF) posee actividades de ceto-enol tautomerasa y citoquinas.
• El MIF está implicado en enfermedades inflamatorias y cáncer.
• Los ensayos existentes para los inhibidores de MIF que utilizan el éster metílico de l-dopacromo o el ácido 4-hidroxifenilpirúvico presentan inestabilidad de sustrato e interferencia espectral.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar un ensayo robusto y preciso para la identificación de inhibidores de MIF.
• Caracterizar la unión de los nuevos inhibidores de la MIF.
• Para aclarar la base estructural de las interacciones potentes con los inhibidores MIF.

Principales métodos:

• Síntesis de inhibidores MIF con etiqueta fluorescente.
• Desarrollo de un ensayo basado en la polarización por fluorescencia para la medición directa de la unión.
• Cristalografía de rayos X para determinar las estructuras complejas proteína-ligando.

Principales resultados:

• Un nuevo ensayo de polarización por fluorescencia mide con precisión la unión directa del inhibidor al MIF.
• El ensayo identificó con éxito inhibidores competitivos, no competitivos y covalentes.
• Los inhibidores más potentes exhibieron valores de Kd alrededor de 50 nM.
• Las estructuras de rayos X revelaron enlaces clave de hidrógeno, interacciones aril-aril y catión-π que impulsan la unión de alta afinidad.

Conclusiones:

• El ensayo de polarización por fluorescencia desarrollado es adecuado para el cribado de alto rendimiento de inhibidores de MIF.
• Las ideas estructurales guiaron el diseño de nuevos inhibidores potentes de MIF.
• Este trabajo proporciona una base para el desarrollo de nuevas terapias dirigidas a MIF.