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Labeling DNA Probes

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DNA probes are fragments of DNA labeled with a reporter tag to enable their detection or purification. The resulting labeled DNA probes can then hybridize to target nucleic acid sequences through complementary base-pairing, and may be used to recover or identify these regions.
Radioisotopes, fluorophores, or small molecule binding partners like biotin or digoxigenin, are the most widely used reporter tags for labeling DNA probes. These labels can be attached to the probe DNA molecule via...
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Protein Dynamics in Living Cells01:19

Protein Dynamics in Living Cells

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Different fluorescence-based techniques are used to study the protein dynamics in living cells. These techniques include FRAP, FRET, and PET.
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Super-resolution Fluorescence Microscopy01:37

Super-resolution Fluorescence Microscopy

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Super-resolution fluorescence microscopy (SRFM) provides a better resolution than conventional fluorescence microscopy by reducing the point spread function (PSF). PSF is the light intensity distribution from a point that causes it to appear blurred. Due to PSF, each fluorescing point appears bigger than its actual size, and it is the PSF interference of nearby fluorophores that causes the blurred image. Various approaches to achieving higher resolution through SRFM have recently been...
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Pruebas fluorogénicas para imágenes multicolores en células vivas

Gražvydas Lukinavičius1,2, Luc Reymond1, Keitaro Umezawa3

  • 1Institute of Bioengineering, NCCR in Chemical Biology, Institute of Chemical Sciences and Engineering (ISIC), Ecole Polytechnique Fédérale de Lausanne (EPFL) , 1015 Lausanne, Switzerland.

Journal of the American Chemical Society
|July 16, 2016
PubMed
Resumen
Este resumen es generado por máquina.

Los investigadores desarrollaron un nuevo fluoróforo rojo lejano, SiR700, para imágenes avanzadas de células vivas. Este tinte de silicio-rodamina permite la microscopía de superresolución multicolor, mejorando las capacidades de visualización celular.

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Área de la Ciencia:

  • Imágenes celulares y moleculares
  • La biofotónica
  • Química orgánica

Sus antecedentes:

  • La obtención de imágenes de células vivas requiere sondas fluorescentes con propiedades espectrales específicas y compatibilidad con técnicas avanzadas de microscopía.
  • Las sondas existentes pueden tener limitaciones en el rango espectral o capacidades multicolores para aplicaciones de superresolución.
  • Los tintes de silicio-rodamina ofrecen propiedades ópticas ajustables adecuadas para imágenes biológicas.

Objetivo del estudio:

  • Introducir un nuevo fluoróforo de silicio-rodamina de color rojo lejano (SiR700) para la obtención de imágenes multicolores de células vivas.
  • Desarrollar y validar sondas basadas en SiR700 para diversos objetivos y aplicaciones celulares.
  • Para demostrar la utilidad de SiR700 en microscopía de superresolución de células vivas multicolores.

Principales métodos:

  • Síntesis y caracterización del fluoróforo basado en rodamina de silicio SiR700.
  • Desarrollo de sondas conjugadas con SiR700 para la F-actina, los microtúbulos, los lisosomas y la etiqueta SNAP.
  • Prueba del rendimiento de la sonda en células vivas, incluida la permeabilidad celular, la fluorogenicidad y la compatibilidad con la microscopía de superresolución.
  • Realización de experimentos de imagen multicolor en conjunto con las sondas basadas en SiR650.

Principales resultados:

  • SiR700 exhibe máximos de excitación y emisión a 690 nm y 715 nm, respectivamente.
  • Las sondas basadas en SiR700 son fluorogénicas, permeables a las células y adecuadas para la microscopía de superresolución.
  • La imagen de superresolución multicolor de células vivas se logró en el espectro rojo lejano utilizando sondas SiR700 y SiR650.
  • Las nuevas sondas permiten una mejor visualización de las estructuras y procesos celulares.

Conclusiones:

  • SiR700 es un fluoróforo rojo lejano versátil para imágenes avanzadas de células vivas.
  • Las sondas basadas en SiR700 amplían significativamente la capacidad de microscopía de superresolución de células vivas multicolores.
  • Este desarrollo ofrece nuevas posibilidades para el estudio de procesos celulares dinámicos con mayor resolución y multiplexación espectral.