El bloqueo reversible de la cadena de oligonucleótidos permite la captura y la amplificación de las cadenas de ARNm α...

Área de la Ciencia:

• Biología molecular
• La genómica
• Inmunología

Sus antecedentes:

• La secuenciación de próxima generación (NGS) permite estudios genéticos en toda la población, pero no puede resolver las variaciones celulares individuales.
• Técnicas de célula única como el código de barras Drop-seq para la secuenciación, creando paisajes transcripcionales específicos de la célula.
• Los métodos actuales tienen una capacidad limitada para capturar información más allá de la cola poli-A de ARNm.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar cuentas con código de barras de ADN con múltiples secuencias de captura específicas de transcripción para mejorar el perfil genético.
• Para permitir la captura de alto rendimiento y el emparejamiento de secuencias específicas de ARNm de células individuales.

Principales métodos:

• Utilizó un grupo de bloqueo de cadena reversible para sintetizar cuentas con código de barras de ADN.
• Perlas de ingeniería con secuencias de captura dirigidas a dominios constantes de los ARNm de las cadenas α y β de los receptores de células T (TCR).
• Se ha demostrado la captura y el emparejamiento de las secuencias TCRα y TCRβ del ARN total de las células T.

Principales resultados:

• Con éxito sintetizado cuentas con código de barras de ADN con múltiples secuencias de captura.
• Demostró la capacidad de estas cuentas para capturar y emparejar secuencias TCRα y TCRβ.
• Habilitó la posterior transcripción inversa y la amplificación por PCR de las secuencias de TCR emparejadas.

Conclusiones:

• Este estudio presenta el primer ejemplo de cuentas de captura con múltiples secuencias de captura.
• La tecnología desarrollada ofrece una utilidad significativa para emparejar cadenas de receptores de antígenos en enfermedades autoinmunes.
• Este método también se puede aplicar para medir las proporciones de variantes de empalme de ARNm en células madre cancerosas.