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Ribosome Profiling02:24

Ribosome Profiling

4.3K
Ribosome profiling or ribo-sequencing is a deep sequencing technique that produces a snapshot of active translation in a cell. It selectively sequences the mRNAs protected by ribosomes to get an insight into a cell’s translation landscape at any given point in time.
Applications of ribosome profiling
Ribosome profiling has many applications, including in vivo monitoring of translation inside a particular organ or tissue type and quantifying new protein synthesis levels.
The technique...
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Interrogación de alta resolución de elementos funcionales en el genoma no codificante

Neville E Sanjana1, Jason Wright2, Kaijie Zheng2

  • 1Broad Institute of MIT and Harvard, 7 Cambridge Center, Cambridge, MA 02142, USA. McGovern Institute for Brain Research, Department of Brain and Cognitive Sciences, Department of Biological Engineering, Massachusetts Institute of Technology, Cambridge, MA 02139, USA. nsanjana@nygenome.org zhang@broadinstitute.org.

Science (New York, N.Y.)
|October 7, 2016
PubMed
Resumen
Este resumen es generado por máquina.

Los investigadores desarrollaron pantallas CRISPR para identificar elementos no codificantes que influyen en la resistencia a los medicamentos del melanoma. Estas regiones funcionales no codificantes tienen un impacto en la regulación génica y podrían ser objeto de nuevas terapias.

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Área de la Ciencia:

  • La genómica
  • Biología molecular
  • Investigación del cáncer

Sus antecedentes:

  • El genoma no codificante juega un papel crucial en la regulación genética y la patogénesis de la enfermedad.
  • Las herramientas actuales para identificar y manipular elementos no codificados son limitadas, lo que dificulta la investigación.
  • La resistencia al inhibidor BRAF del melanoma es un desafío clínico significativo.

Objetivo del estudio:

  • Desarrollar y aplicar métodos de detección CRISPR para la identificación rápida y la caracterización funcional de elementos genómicos no codificantes.
  • Investigar el papel de las regiones no codificantes en la resistencia al inhibidor de BRAF en el melanoma.
  • Explorar el potencial de los elementos no codificantes para las estrategias terapéuticas.

Principales métodos:

  • Utilizó pantallas CRISPR agrupadas con aproximadamente 18,000 ARN guías únicas dirigidas a más de 700 kilobases que rodean los genes NF1, NF2 y CUL3.
  • Se analizaron las regiones no codificantes en busca de características de importancia funcional para modular la resistencia a los fármacos.
  • Se realizaron mutaciones de ingeniería en regiones específicas del locus CUL3 para evaluar los efectos sobre la unión al factor de transcripción y las modificaciones epigenéticas.

Principales resultados:

  • Se han identificado localizaciones no codificantes que modulan significativamente la resistencia al inhibidor de BRAF en el melanoma.
  • Se descubrió que estas regiones funcionales no codificadas poseen características predictivas de la actividad reguladora.
  • Se demostró que las mutaciones de ingeniería en las regiones no codificantes del locus CUL3 alteran la ocupación del factor de transcripción y los paisajes epigenéticos, afectando la regulación genética y la resistencia a los medicamentos.

Conclusiones:

  • Desarrollo de nuevas herramientas de detección CRISPR para el descubrimiento eficiente de elementos no codificantes funcionales.
  • Se estableció el vínculo entre las regiones no codificantes específicas, la regulación génica y la resistencia al quimioterapia del melanoma.
  • Elementos no codificantes implicados como objetivos terapéuticos potenciales para superar la resistencia a los medicamentos en el cáncer.