RIPK1 inhibe la necroptosis inducida por ZBP1 durante el desarrollo

Área de la Ciencia:

• Biología celular
• Inmunología
• Los mecanismos moleculares de la muerte celular

Sus antecedentes:

• La proteína quinasa 1 que interactúa con los receptores (RIPK1) es crucial para la supervivencia celular, ya que la deficiencia de RIPK1 conduce a la letalidad perinatal debido a la apoptosis y la necroptosis aberrantes.
• Si bien los mutantes catalíticamente inactivos de RIPK1 permiten la supervivencia, lo que sugiere una función de andamio, el papel preciso de RIPK1 en la regulación de las vías de muerte celular sigue siendo incompleto.
• El motivo de interacción homotípico de RIP (RHIM) es un dominio clave en RIPK1 involucrado en las interacciones proteína-proteína dentro de la señalización de la muerte celular.

Objetivo del estudio:

• Investigar el papel del motivo de interacción homotípico RIP (RHIM) de la proteína quinasa 1 que interactúa con los receptores (RIPK1) en la prevención de la muerte celular programada durante el desarrollo.
• Para aclarar la interacción entre RIPK1, la proteína de unión Z-ADN 1 (ZBP1) y RIPK3 en el contexto de la regulación de la necroptosis.
• Determinar si la activación de RIPK3 mediada por ZBP1 contribuye a la letalidad observada en ratones con función de RIPK1 alterada.

Principales métodos:

• Generación y análisis de ratones Ripk1^RHIM/RHIM con residuos RHIM mutados de RIPK1.
• Evaluación de los marcadores de necroptosis (autofosforilación de RIPK3) y la letalidad en modelos de ratón modificados genéticamente (por ejemplo, knockout de Ripk3, knockout de MLKL).
• Pruebas de coinmunoprecipitación para estudiar las interacciones proteína-proteína entre ZBP1 y RIPK3 en diversos antecedentes genéticos.

Principales resultados:

• Los ratones que expresaban RIPK1 con un RHIM mutado (Ripk1^RHIM/RHIM) exhibieron letalidad perinatal y autofosforilación de RIPK3, lo que indicaba necroptosis.
• El bloqueo de la necroptosis a través de la deficiencia genética de RIPK3 o MLKL, o mediante el uso de RIPK3 catalíticamente inactivo, rescató la letalidad en ratones Ripk1.
• La pérdida de la proteína de unión Z-ADN 1 (ZBP1) también evitó la letalidad en ratones Ripk1^RHIM/RHIM, y ZBP1 interactuó con RIPK3 en ausencia de RIPK1 y MLKL funcionales.

Conclusiones:

• El dominio RHIM de RIPK1 actúa como un freno crítico, impidiendo que ZBP1 se involucre inapropiadamente con RIPK3 e inicie la necroptosis durante el desarrollo.
• La necroptosis dependiente de ZBP1-RIPK3-MLKL es una vía clave que debe ser suprimida por RIPK1 para la supervivencia embrionaria y perinatal normal.
• Estos hallazgos revelan una nueva función inhibidora para el RIPK1 RHIM en la salvaguardia del desarrollo mediante el control de la señalización necroptótica mediada por ZBP1.