Identificación de la gliceraldehído 3-fosfato deshidrogenasa como una proteína de unión cíclica a la adenosina...

Área de la Ciencia:

• Biología celular
• La bioquímica
• La señalización molecular

Sus antecedentes:

• La adenosina difosforibosa cíclica (cADPR) es un regulador clave del calcio intracelular derivado del dinucleótido de nicotinamida adenina (NAD+).
• El mecanismo molecular preciso y los intermediarios de proteínas que vinculan cADPR a la liberación de calcio desde el retículo endoplasmático (ER) a través de los receptores de ryanodina (RyR) han permanecido elusivos.
• Comprender estas interacciones es crítico para descifrar la homeostasis celular del calcio y las vías de señalización.

Objetivo del estudio:

• Identificar las proteínas que se unen a la cADPR y median su actividad de movilización del calcio.
• Para caracterizar la interacción entre cADPR y su proteína de unión (s).
• Para aclarar el papel de la proteína identificada en la liberación de calcio mediada por cADPR.

Principales métodos:

• Síntesis de un nuevo agonista cADPR de etiquetado por fotoafinidad (PAL-cIDPRE) para la identificación de proteínas.
• Purificación por afinidad de las proteínas de unión a cADPR de las células T de Jurkat humanas.
• Ensayos de resonancia plasmónica de superficie (SPR) para caracterizar la cinética de unión y la afinidad.
• Experimentos in vivo e in vitro para evaluar las interacciones proteicas y las consecuencias funcionales.

Principales resultados:

• La gliceraldehído 3-fosfato deshidrogenasa (GAPDH) fue identificada como una proteína de unión directa para la cADPR.
• El análisis de SPR confirmó la unión de alta afinidad entre cADPR y GAPDH, con sitios específicos de unión mapeados en GAPDH.
• Se demostró que la cADPR induce una interacción transitoria entre la GAPDH y las RyRs in vivo, y la reducción de la GAPDH suprime la liberación de calcio inducida por la cADPR.

Conclusiones:

• GAPDH es la proteína buscada desde hace mucho tiempo que se une a cADPR.
• La GAPDH es esencial para mediar la movilización de calcio (Ca2+) inducida por la cADPR desde la ER a través de las RyR.
• Este hallazgo establece un nuevo papel para GAPDH en la señalización de calcio intracelular.